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目的:探讨过表达膜联蛋白A2受体(annexin A2 receptor,AX2R,AXIIR,c5orf39)对新生血管形成的作用研究。方法:根据Gene Bank的编码序列,用primer premier 5软件设计AX2R的PCR(polymerase chain reaction,PCR)引物,真核重组质粒Lenti-AX2R的制备方法包括以下步骤:通过PCR合成人的AX2R基因片段;将扩增的核苷酸序列片段与真核质粒连接,该插入片段的酶切位点分别为Xbar I和Sal I,再将所述的真核重组质粒转化到感受态细菌中,涂板子、挑克隆、摇菌扩增,使用碱裂解法抽提真核重组质粒;通过DNA测序筛选出正确插入的重组质粒克隆。将构建好的质粒Lenti-AX2R转染人胚肾细胞(293T),采用Western blotting和RT-PCR方法检测真核过表达质粒的蛋白和mRNA(messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达水平。将Lenti-AX2R包装为慢病毒感染视网膜血管内皮细胞(human retinal endothelial cells,HRECs)和脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),以达到内皮细胞过表达AX2R基因的目的。通过细胞增殖实验、细胞迁移实验和管养形成实验检测过表达AX2R对血管内皮细胞功能的影响,采用小鼠主动脉环血管形成实验检测过表达AX2R在体外对新生血管形成的影响。采用流式细胞仪检测过表达AX2R对HRECs和HUVECs两种细胞细胞周期的影响,并用Western blotting检测Cyclin A1、Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1、CDK1和p-CDC2一系列细胞周期相关蛋白的表达水平;利用荧光显微镜观察Lenti-EGFP-AX2R融合质粒在HRECs和293T细胞的定位情况;采用Western blotting和RT-PCR检测蛋白降解相关通路分子KLF2(Krüppel like transcription factor 2)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growther factor,VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growther factor receptor 2,VEGFR2)蛋白和基因表达水平。结果:通过将构建的过表达AX2R质粒的测序结果与BALST比对,发现与Gene Bank中公布的序列一致;Western blotting和RT-PCR的检测结果显示,同空白对照组和阴性对照组相比,AX2R的蛋白表达水平和基因表达水平均显著升高。过表达AX2R慢病毒通过感染HRECs和HUVECs一定的时间后,同对照组相比,细胞增殖的数量、细胞向远处迁移的细胞数和细胞形成管状结构的数量均明显减少;在体外培养预先感染过表达AX2R慢病毒的小鼠主动脉环发现,实验组小鼠主动脉环开始长出新生血管的初始时间明显延迟,并且萌出的新生血管不论是血管的长度、数量以及血管形态的完整度都明显弱于其他两组。流式细胞仪检测结果采用Modfitsoftware软件分析显示在过表达AX2R组,处于G1期的细胞数不变,处于S期的细胞数增加,处于G2期的细胞数减少,细胞周期相关蛋白cyclin B1和cyclin E1的表达水平没有变化,CDK1和p-CDC2的蛋白表达水平升高,cyclin A1和cyclin E1的蛋白表达水平降低;荧光显微镜观察结果发现Lenti-EGFP-AX2R在HRECs和293T细胞内的表达蛋白成团聚集存在;Western blotting和RT-PCR检测结果显示HRECs和HUVECs过表达了AX2R后,KLF2的蛋白和基因表达水平升高,VEGF和VEGFR2的表达水平则是下降的。结论:成功构建了AX2R的过表达质粒Lenti-AX2R。Lenti-AX2R能够抑制HRECs和HUVECs两种内皮细胞的迁移、增殖、管样形成和抑制小鼠主动脉环新生血管的形成,可能是通过抑制细胞周期和KLF2的蛋白降解相关通路来发挥作用的。