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目的:观察大容量肺灌洗(whole lung lavage,WLL)对家兔肺泡上皮紧密连接蛋白(claudin-4)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达的影响,探讨WLL相关性肺损伤的修复机制。方法:将15只家兔随机分为对照组、大容量肺灌洗后2小时组(肺灌洗2h组)、大容量肺灌洗后72小时组(肺灌洗72h组),每组5只。行WLL前各组家兔均禁食12h,禁饮6h。肺灌洗2h组和肺灌洗72h组家兔耳缘静脉注入3%戊巴比妥(1mL/kg),待进入全麻状态后行气管切开,插入气管插管导管,确保左、右肺分隔良好,左肺给予氧气吸入,氧流量控制在160~200mL/min,生理盐水(温度约37℃)反复灌洗右肺,灌洗总量按25~30mL/kg计算,每次灌入约10mL,生理盐水沿灌洗导管注入(速度约5mL/min),每次注入完毕后将家兔处于头低足高位,让灌洗液自然引流干净,重复上述操作,灌洗液回收率均在90%以上,后拔出气管插管,逐层缝合,术后常规处理,肺灌洗72h组家兔清醒后可逐渐恢复正常饮食。对照组家兔进入全麻状态后行气管切开,插入气管插管导管,确保左、右肺分隔良好,左肺给予氧气吸入,氧流量控制在160~200mL/min,右肺不予以灌洗。对照组家兔经以上操作后2小时行肺部CT检查,后股动脉放血处死家兔;肺灌洗2h组和肺灌洗72h组分别于设定时间点前15min再次麻醉家兔,行肺部CT检查后股动脉放血处死家兔。测量右肺湿/干重比,取部份右肺组织行石蜡切片,he染色观察肺组织的病理改变并进行评分;电镜观察肺泡上皮的超微结构;免疫组化检测肺组织claudin-4及e-cadherin的表达,其相对表达量用平均光密度值(od值)表示。结果:(1)家兔表现:肺灌洗2h组及肺灌洗72h组家兔大容量肺灌洗时出现呼吸急促,唇鼻部皮肤发绀明显,偶有呛咳等不适反应,术毕后上述症状逐渐消失,肺灌洗72h组术后清醒后饮食、活动无明显异常;对照组家兔无上述反应。(2)家兔肺部ct改变:肺灌洗2h组家兔左侧肺组织未见明显异常,但右肺组织见不均匀磨玻璃样浸润影;对照组和肺灌洗72h组家兔双肺组织肺部ct检查未见明显异常改变。(3)肺组织的大体表现:肺灌洗2h组家兔右肺组织体积增大,弹性减退,部份色泽暗红,表面可见散在出血点,切面可见少量泡沫状液体流出,左侧肺组织未见明显异常;肺灌洗72h组及对照组两侧肺组织表面光滑,弹性好,无明显出血点及水肿。(4)肺湿/干重比(w/d):与对照组肺w/d值(4.34±0.06)比较,肺灌洗2h组的肺w/d值(4.72±0.09)明显增高,差异有统计学意义(p<0.05);与肺灌洗2h组比较,肺灌洗72h组的肺w/d值(4.36±0.07)明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);肺灌洗72h组w/d值较对照组高,但差异无统计学意义(p>0.05)。(5)he染色:肺灌洗2h组家兔肺泡壁毛细血管扩张充血,可见少量炎症细胞浸润,肺泡间隔增厚、局灶性肺水肿,肺泡腔内可见淡红色液体,但肺组织结构完整;肺灌洗72h组家兔肺组织病理改变较肺灌洗2h组减轻,肺泡结构完整,肺泡腔内无渗液,但仍有少许炎症细胞浸润,对照组家兔he染色未见明显异常改变。肺灌洗2h组的病理评分(5.0±0.7)明显高于对照组(0.2±0.4)和肺灌洗72h组(1.2±0.4),差异有统计学意义(P均<0.05);肺灌洗72h组病理评分较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)电镜显示:对照组肺泡上皮细胞间紧密连接结构完整;肺灌洗2h组细胞间紧密连接有破坏,细胞间隙增宽,部分I型肺泡上皮细胞断裂;肺灌洗72h组上述改变减轻。(7)免疫组织化学:对照组家兔claudin-4及E-cadherin主要在肺泡上皮细胞包膜呈连续的阳性表达,包浆有少许表达;肺灌洗2h组肺泡上皮细胞claudin-4及E-cadherin的表达均明显低于对照组,为不连续表达;肺灌洗72h组claudin-4及E-cadherin表达较肺灌洗2h组增强,但仍低于对照组。肺灌洗2h组claudin-4及E-cadherin表达的OD值分别为(0.93±0.12)、(1.12±0.09),较对照组claudin-4及E-cadherin表达的OD值(1.44±0.05)、(1.74±0.05)及肺灌洗72h组claudin-4及E-cadherin表达的OD值(1.32±0.04)、(1.62±0.07)明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,肺灌洗72h组claudin-4及E-cadherin表达的OD值仍有降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)大容量肺灌洗可导致家兔肺泡上皮屏障一定程度的损伤。(2)大容量肺灌洗后家兔肺泡上皮claudin-4及E-cadherin表达降低。(3)大容量肺灌洗相关性肺损伤可在一定时间内自行修复。(4)Claudin-4及E-cadherin可能参与了肺灌洗液的清除及肺损伤的修复。