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枸杞(Lycium barbarum)作为一种药食同源性植物,具有较高的食用及药用价值。迄今为止,枸杞提取物(Lycium barbarum extract,LBE)是最受重视和研究最多的化学成分。然而,仅有很少的研究采用已阐明结构的多糖进行生物活性研究,大多数用于药理学研究的多糖样品的制备方法在文献之间差别很大。不同的制备和纯化方法可能会影响提取的化学结构、分子量和糖链构象,并由此影响生物活性。为了明确不同分离纯化方法对LBE组成和生物活性的影响,本研究以枸杞子为试验原料,采用不同工艺方法提取枸杞提取物,并使用文献记载的分离方法纯化,得到14个样品,对其主要化学成分(总多糖、总蛋白、总酚、总黄酮)、生物活性(FRAP法、羟自由基法、α-葡萄糖苷酶活性抑制以及乙酰胆碱酯酶活性抑制)进行比较研究,以揭示不同工艺提取的LBP主要化学成分和活性之间的差异和相关关系,为不同工艺提取的枸杞提取物提供质量评价依据。主要研究结果如下:
(1)用不同工艺提取枸杞粗提取物,采用的提取方法有水提醇沉法、酶-水提取、半仿生提取法,三者提取枸杞粗提取物的得率分别为15.38±0.53%、2.63±0.68%、14.03±0.95%。
(2)不同工艺处理后的枸杞提取物各成分有所差异,枸杞粗提取物经膜分离纯化后的提取物中多糖、蛋白含量有明显的升高,对应的小分子物质含量显著降低(p<0.05),说明采用膜分离法对大分子物质有良好的纯化效果。经脱蛋白和膜分离后,大分子物质中蛋白含量较为稳定,维持在3.5%左右,为枸杞提取物可能是糖蛋白提供了佐证。
(3)枸杞粗提取物和纯化后的LBE表现出不同的抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性,分子量大于2000Da的LBE抗氧化效果、α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性显著强于枸杞粗多糖(p<0.05),醇处理煎煮法脱蛋白LBE的亚铁离子的当量值为0.61mmol/L、醇处理煎煮法脱蛋白的LBE的抑制率为52.38%,醇预处理温水提醇沉法制备的大分子物质对α-葡萄糖苷酶抑制活性最强为3.44±0.18mg/mL,醇预处理煎煮法制备的大分子物质对乙酰胆碱酯酶抑制活性最强为14.90±1.42mg/mL。
(4)相关分析表明总糖、总黄酮、总多酚含量与抗氧化活性具有一定的相关性,醇预处理煎煮法制备的枸杞多糖的抗氧化活性强,可能与总糖、总黄酮、总多酚含量呈强相关,多酚类物质是抗氧化活性的主要贡献者。α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性与总多酚、黄酮含量显著相关,与其他几种化学成分无显著相关关系。
(1)用不同工艺提取枸杞粗提取物,采用的提取方法有水提醇沉法、酶-水提取、半仿生提取法,三者提取枸杞粗提取物的得率分别为15.38±0.53%、2.63±0.68%、14.03±0.95%。
(2)不同工艺处理后的枸杞提取物各成分有所差异,枸杞粗提取物经膜分离纯化后的提取物中多糖、蛋白含量有明显的升高,对应的小分子物质含量显著降低(p<0.05),说明采用膜分离法对大分子物质有良好的纯化效果。经脱蛋白和膜分离后,大分子物质中蛋白含量较为稳定,维持在3.5%左右,为枸杞提取物可能是糖蛋白提供了佐证。
(3)枸杞粗提取物和纯化后的LBE表现出不同的抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性,分子量大于2000Da的LBE抗氧化效果、α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性显著强于枸杞粗多糖(p<0.05),醇处理煎煮法脱蛋白LBE的亚铁离子的当量值为0.61mmol/L、醇处理煎煮法脱蛋白的LBE的抑制率为52.38%,醇预处理温水提醇沉法制备的大分子物质对α-葡萄糖苷酶抑制活性最强为3.44±0.18mg/mL,醇预处理煎煮法制备的大分子物质对乙酰胆碱酯酶抑制活性最强为14.90±1.42mg/mL。
(4)相关分析表明总糖、总黄酮、总多酚含量与抗氧化活性具有一定的相关性,醇预处理煎煮法制备的枸杞多糖的抗氧化活性强,可能与总糖、总黄酮、总多酚含量呈强相关,多酚类物质是抗氧化活性的主要贡献者。α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性与总多酚、黄酮含量显著相关,与其他几种化学成分无显著相关关系。