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WRKY蛋白是一类在植物中具有重要作用的转录调控因子,其成员参与了植物的生长、发育、代谢,以及对生物或非生物胁迫应答的反应。为了研究WRKY转录因子在辣椒上的功能,从辣椒cDNA中克隆了WRKY转录因子CaRKNIF1基因,并对其编码蛋白的氨基酸序列、基因组中的拷贝数、内含子等基因结构特性,及其表达特性等进行了分析。主要研究结果如下:1.以辣椒品种HDA149为材料,接种南方根结线虫二龄幼虫,利用所设计的简并引物,通过同源克隆法获得4个辣椒WRKY基因片段,采用RACE技术克隆了CaRKNIF1基因的cDNA全长序列。CaRKNIF1基因全长2,139 bp,包含1,473 bp的开放阅读框,编码一个含490个氨基酸残基的蛋白,预测蛋白分子量大约是53.6 KDa,等电点8.09,GenBank登录号为DQ180348。2.以辣椒基因组为材料,设计CaRKNIF1基因的全长引物,进行PCR扩增,结果表明CaRKNIF1基因无内含子存在。根据CaRKNIF1基因序列设计引物(不含WRKY保守区),PCR扩增产物进行地高辛标记,获得探针。辣椒基因组DNA用EcoRI、EcoRⅤ、BamHI三种限制性内切酶消化,进行Southern杂交,结果表明CaRKNIF1基因以多拷贝的形式存在于植物体内。3.生物信息学分析表明,辣椒CaRKNIF1转录因子的氨基酸序列含有两个保守的WRKY结构域,属于第Ⅰ组WRKY转录因子;CaRKNIF1蛋白可能定位于细胞核内;预测了该蛋白的二级结构、三级结构特点;并推导出该蛋白具有转录、转录调控、信号转导、胁迫应答等功能。4.对辣椒进行多种胁迫或诱导,提取叶片总RNA进行Northern杂交。结果表明:水杨酸、南方根结线虫和机械伤害处理辣椒后,CaRKNIF1在不同时间点表达量不同;乙烯、NaCl可以诱导CaRKNIF1的表达,茉莉酸没有诱导作用。据此推断CaRKNIF1基因应与水杨酸、乙烯信号转导途径有关。