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口蹄疫(Foot and Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus，FMDV)引起的多种偶蹄动物共患的急性传染病，被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病之首。 FMDV基因组只有一个开放的读码框，首先翻译为一个多聚蛋白，经过蛋白酶切割为成熟的结构和非结构蛋白。其中3C基因编码一个巯基蛋白酶，它将FMDV的P12A前体切割成VP4，VP2，VP3和VP1四种结构蛋白，包装成病毒的衣壳。因此3C在FMDV复制中具有非常重要的作用。RNA干扰(RNAi)现象是由与靶基因序列同源的dsRNA引发的广泛存在于动植物中的序列特异性基因转录后的沉默过程。研究发现，小于30nt的siRNA分子可以诱导产生明显的RNA干扰现象，抑制甚至关闭相应靶基因的表达，被广泛用于基因功能、遗传病和感染性疾病的治疗研究，取得了诱人的结果。FMDV的3C基因在FMDV不同血清型和亚型中非常保守，本研究针对3C基因开展了siRNA的研究，筛选到可以有效抑制FMDV复制的siRNA分子，现报告如下。 首先，本研究克隆了FMDV O型的3C和3D基因，在大肠杆菌中进行了高效表达，并用纯化的表达产物免疫家兔，制备了的多克隆抗体，为3C和3D基因表达与功能研究提供了有用工具。 我们详细比较了O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1七个血清型FMDV的3C基因序列，根据其高度保守区的序列和美国Ambion公司建议的siRNA设计原则，设计并合成了2个siRNA模板3C07和3C12，分别克隆到siRNA表达载体pSilencer 4.1-CMV neo的CMV启动子下游，构建相应的重组表达质粒pSilencer-3C07和pSilencer-3C12。同时，从FMDV O型感染性克隆中通过PCR扩增了3C基因，将3C基因克隆到真核表达载体pEGFP-N3中，按照读码框架与EGFP基因的5’端融合，获得重组表达质粒p3C-EGFP。将pSilencer-3C07、pSilencer-3C12和阴性对照质粒pSilencer-NC分别与p3C-EGFP共转染BHK-21细胞，荧光显微镜观察和流式细胞仪分析结果表明，3C07和3C12均能不同程度地抑制3C基因的表达，抑制效率分别为30.9％和60.5％，可见3C12比3C07对3C基因表达的抑制效率高。 进一步将pSilencer-3C07、pSilencer-3C12和pSilencer-NC分别转染BHK-21细胞，24h后接种FMDV，接种46h后病毒滴度下降了10-100倍，半定量RT-PCR和