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海洋噬菌体是海洋生态系统中丰度最高的一类微生物,对海洋生态系统物质、能量的流动和群落多样性的维持有着重要的作用,已成为海洋生态学的研究热点,但海洋噬菌体的整体研究仍处于初步阶段。本文旨在以病鱼(患肠炎)肠道中分离出的菌株为宿主,从海泥中分离出噬菌体,研究其生物学特性,并从基因组学和蛋白组学两方面着手,对其属性和遗传相关性进行探究,为今后海洋噬菌体的研究提供依据。本研究内容包含如下几个方面:1.从患肠炎的病鱼肠道中分离出5株优势菌株,记为S1,S2,S3,S4,S5,经革兰氏染色鉴定均为革兰氏阴性菌。5株菌通过16Sr DNA测序和进化树分析可划分为Vibrio,Citrobacter,Alcaligenes,Shewanella 4个属。通过测定生长曲线可知:S1,S4,S5培养14h,S2和S3培养10h为最佳的噬菌体感染时间。2.以上述5株菌作为宿主,培养至最佳噬菌体感染时间后分别与海泥共同培养,分离出4株噬菌体,分别标记为P1,P2,P3,P4,其中以S1为宿主的培养体系未分离到噬菌体。4株噬菌体经3~5次的纯化和扩大培养后效价均大于109 pfu/m L,RTD值均在103 pfu/m L~104 pfu/m L,表明4株噬菌体的裂解性都较强。经噬菌斑分析可初步判定4株噬菌体为不同种。通过电镜形态观察可将4株噬菌体划分为Myoviridae和Corticovirus两个科。通过对4株噬菌体的基因组的酶解分析,确定其核酸类型均为DNA。对保藏方式的探究得知,冷冻干燥的保存效果最佳。3.研究4株噬菌体对温度、p H、紫外照射、氯仿等理化因素的敏感性,绘制一步生长曲线,确定最佳感染复数(MOI),探究吸附动力学,并利用36株菌研究其裂解谱。设定24条随机引物进行RAPD-PCR实验,最终最佳退火温度确定为36℃。所有引物中只有5条能扩增出RAPD图谱,多态性谱带占总谱带的82.4%;通过分析遗传系数和聚类树状图得知,4种噬菌体的亲缘关系比较远,遗传相似系数在0.36~0.58之间。经SDS-PAGE电泳鉴定:4株海洋噬菌体的主要蛋白质组成含量从多到少依次为:P4,P2,P1,P3,并且P1,P2,P3的主要结构蛋白中含量最多的都是38.3KD大小的蛋白,而P4是58.6KD。