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[目的]为准确、高效、方便的对铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛、球花石斛、大苞鞘石斛和兜唇石斛做出鉴别和质量评价。[方法]以六种石斛为对象,建立高效液相指纹图谱、紫外光谱和高效液相色谱串联质谱,以谱图的差异结合统计学对石斛做鉴别研究。对柚皮素、石斛酚、毛兰素、多糖、葡萄糖、甘露糖和氨基酸进行定量分析,用含量差异对石斛做质量评价。[结果]高效液相指纹图谱相似度介于0.747-0.933,标出共有峰25个,经对照品指认三个峰,分别为柚皮素(20),石斛酚(22),毛兰素(24),结合聚类分析和主成分分析能有效对六种石斛做出鉴别。根据紫外谱图的形状、最大吸收波长和吸光度的差异可对这六种石斛做出鉴别。超高效液相-质谱共检出柚皮素、石斛酚、毛兰素、鼓槌菲、moscatilin、hrysotobibenzyl六种化合物,其中鼓槌石斛六种化合物均检出,铁皮石斛检出柚皮素、石斛酚、毛兰素,金钗石斛检出柚皮素、石斛酚,兜唇石斛只检出moscatilin,大苞鞘石斛未检出鼓槌菲,球花石斛未检出hrysotobibenzyl,可根据这些检出化合物的不同对六种石斛做出鉴别。含量测定及方差分析结果表明,六种石斛的柚皮素含量、石斛酚含量、毛兰素含量、多糖含量、葡萄糖含量、甘露糖含量及氨基酸含量存在显著性差异(P<0.05)。其中鼓槌石斛毛兰素含量最高,均值为(1353±91.67)ug/g,球花石斛的柚皮素和石斛酚含量最高,均值分别为(152±21.28)ug/g和(894±15.829)ug/g,其次为兜唇石斛(P<0.05),其它石斛无显著差异(P>0.05)。从柚皮素、石斛酚和毛兰素含量看,鼓槌石斛、球花石斛和兜唇石斛质量优于其它石斛。铁皮石斛的糖类成分含量最高,甘露糖和葡萄糖的峰面积比符合药典规定(2.4-8.0),其次为兜唇石斛(P<0.05),其它石斛无显著差异(P>0.05)。从糖类成分看,铁皮石斛、兜唇石斛质量较优。铁皮石斛、金钗石斛、兜唇石斛的氨基酸含量较其它石斛高(P<0.05)[结论]高效液相色谱、紫外光谱和质谱信息能对石斛做出鉴别,多成分含量在一定程度上能反映石斛的质量,可以为石斛的鉴别和质量评价提供参考。