TRAIL-BMSCs对直肠癌荷瘤鼠模型的干预及活体示踪研究

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目的:探索BMSC、SW-480的稳定体外培养及Trail诱导凋亡的实验并SW-480皮下荷瘤鼠模型的建立及活体示踪的预试验,为进一步活体下BMSC的示踪、定向归巢及Trail过表达治疗直肠癌的活体研究奠定基础。方法:分离培养大鼠BMSC,并进行形态学及特异性染色细胞鉴定及SPIO标记BMSC并转染Trail基因的活性测定;直肠癌SW-480细胞的培养及传代;TRAIL诱导BMSCs及SW-480细胞的凋亡实验,并进行CCK-8细胞活力及生长曲线的测定、流式细胞仪细胞凋亡测定;一定浓度癌细胞悬浊液皮下注射裸鼠成瘤并TRAIL-BMSCs细胞液注射荷瘤鼠观察肿瘤生长情况,并MRI活体示踪SPIO-BMSCs的定向迁移及归巢情况。结果:利用全骨髓培养法可以获得稳定的BMSC系,培养到第三代细胞纯度较高;SPIO对BMSC标记率几乎达到99%并且标记后其活性没有受到抑制,并转染Trail基因后BMSCs活性未受到影响;TRAIL对SW-480有明显的诱导凋亡的作用,对BMSC没有明显的诱导凋亡作用(实验组及对照组的细胞活性无明显差异,P>0.05);利用一定浓度的SW-480细胞悬浊液注射于裸鼠腹股沟皮下可以的到稳定的荷瘤鼠模型,TRAIL-BMSCs细胞液注射荷瘤鼠后实验组荷瘤鼠肿瘤组织生长受到抑制;MRI荷瘤鼠示踪显示Spio-BMSCs可以定向归巢到癌组织。结论:全骨髓培养法可以得到稳定并且纯度高的BMSC为后续的实验及临床应用提供充足的BMSC;TRAIL对BMSC无诱导凋亡的作用,而对SW-480有明显的诱导凋亡的特性并且有浓度呈正相关;一定浓度SW-480细胞液注射于裸鼠皮下可以得到稳定荷瘤鼠模型,MRI活体示踪荷瘤鼠显示SPIO-BMSCs定向归巢到癌组织,为进一步实验奠定了基础。
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