瓶子草组培快繁和植株再生

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瓶子草是近年来新兴的观赏性食虫植物,原产美洲。因其独特的生物学特征和捕虫的变态叶而受到人们的青睐。瓶子草进入中国市场较晚,市场需求量大,因此具有重要的开发价值和广阔的市场前景。分株、扦插和播种等传统繁殖方法也因繁殖系数低且耗时长而难以形成规模化生产。因此,利用组织培养进行瓶子草快速繁殖,有利于瓶子草产业化发展。同时,建立瓶子草的再生体系具有重要的理论价值,并可为今后深入研究提供实用技术。 本研究以瓶子草单芽作为实验材料,比较了不同浓度BA和TDZ对瓶子草芽体增殖的影响,优化了NAA的浓度并探讨了MS和N6基本培养基浓度对侧芽增殖的影响。结果表明,BA浓度以1.6mg/L为适宜,此时侧芽增殖最多,且无畸形芽,但高浓度的BA抑制了根的生长;TDZ浓度则以0.1mg/L为最合适,但增殖侧芽数量不如1.6mg/L的BA。高浓度的TDZ比BA更为严重地抑制根的生长,且导致芽团基部产生大量嫩黄色愈伤组织,芽体形态不正常;添加NAA对芽体形成根系有明显地促进作用,但没有能够提高增殖率;低浓度的MS大量元素和N6大量元素都比高浓度时的增殖效果好,相对而言,20%MS大量元素比20%N6大量元素对侧芽增殖效果好。 以单个芽体作为外植体,探讨了有机添加物质对瓶子草生长的影响。结果表明,酶水解酪蛋白、酵母抽提物、椰子水等在实验的浓度范围内都没有能够促进瓶子草的侧芽增殖。500mg/L的酶水解酪蛋白导致16.67%芽体死亡,而浓度为2000mg/L时的死亡率达到53.85%;250mg/L的酵母抽提物导致12.5%的芽体死亡,而浓度为2000mg/L时的死亡率达到64%;5%的椰子水导致3%的芽体死亡,而浓度为20%时的死亡率达到了75%。 以高度为1.5cm左右健壮的瓶子草芽体为材料,探讨了基本培养基、蔗糖和生长素浓度对芽体生根的影响。MS大量元素浓度为20%时,平均根数,平均根长,生根率都比其他浓度相对较好,而N6大量元素则以40%的浓度为最好。相对于20%的MS大量元素,在40%N6大量元素浓度的培养基上的平均根数较大,平均根长较大,生根率高,根较粗且多根毛,有利于后续的移栽生活。培养基中的蔗糖浓度以2.5%为最合适,过低或过高浓度的蔗糖都不利于瓶子草生根。相对于IBA,NAA更有利于瓶子草芽体生根,在添加合适浓度的NAA培养基上培养的芽体所产生的根粗细中等,根毛较多,有利于后续的移栽工作。在NAA的基础上添加多种浓度的IBA都没有能够促进瓶子草的生根。 以瓶子草的叶片为外植体,培养到添加2,4—D0.8mg/L和TDZ2.7 mg/L的培养基上诱导愈伤组织的形成。实验发现,成熟度较大的外植体的愈伤组织形成率最高,达到了60%。将这些愈伤组织接种于含有BA1mg/L和NAA0.1mg/L的分化培养基上,经过60天左右的培养,愈伤组织分化出不定丛芽。将这些丛芽切开再接种子增殖培养基,可以继续增殖形成更多的芽体,而将这些芽体浅插至MS(20%大量元素浓度)+NAA0.1mg/L+蔗糖2.5%+琼脂6g/L的生根培养基上,20天左右芽体基部开始出现红色根突,30天可形成完整根系,生根率达到100%。
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