神经生长因子、还原型谷胱甘肽对Melan-A细胞的黑素合成、增殖及凋亡的影响

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目的  白癜风是一种常见的病因不明的获得性色素脱失性疾病,临床上表现为与黑素细胞选择性破坏相关的皮肤黏膜白斑及毛发变白。就其病因及发病机理提出各种学说,但目前仍没有明确定论。无论如何,现有的组织学,实验室数据都支持凋亡,而非坏死是黑素细胞死亡的方式。  神经营养因子(NTs)属于一组结构与功能上相关的分子家族,包括NGF、BDNF、NT-3、NT-4/-5,其功能主要为促进神经细胞存活与细胞分化或死亡。其中被发现最早、最典型、研究最多的就是神经生长因子(NGF)。已有许多研究发现NGF关系到神经细胞以及其他多种细胞存活、分化或死亡。  还原型谷胱甘肽(GSH)是一种重要的生物抗氧化剂,对细胞有多种生化作用。GSH能够与多种化学物质及其代谢物结合,清除体内氧离子及其他自由基,具有保护细胞膜促进酶活性抗氧化解毒等作用。许多细胞学实验发现,GSH对神经细胞凋亡具有保护作用。  同为神经嵴来源的黑素细胞与神经细胞无论在结构还是功能上,有着很多共性。既然NGF与GSH对神经细胞凋亡有作用,国内外又罕见NGF与GSH对黑素细胞影响的报道,本实验拟研究神经生长因子对黑素细胞黑素合成、增殖及凋亡的作用。  方法  取Melan-A细胞,分为空白对照组、NGF组、GSH组。NGF组分为4小组,分别给予250μg/L、50μg/L、10μg/L和2μg/L的NGF溶液48h。GSH组分为4小组,分别给予2mmol/L,400μmol/L,80μmol/L和16μmol/L的GSH溶液48h。采用倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT法检测细胞增殖活性、NaOH裂解法测黑素合成量、体外氧化DOPA反应方法测酪氨酸酶活性。  另取Melan-A细胞,分为空白对照组、UVA组、UVA+NGF组、UVA+GSH组。UVA组给予6J/cm2UVA照射后培养48h;UVA+NGF组给予6J/cm2UVA照射后给予250μg/L的NGF溶液48h;UVA+GSH组给予6J/cm2UVA照射后给予1mmol/L的GSH溶液48h。采用倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT法检测细胞增殖活性、Annexin-Ⅴ/PI流式双染法测凋亡情况。  结果  根据倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT法、NaOH裂解法、体外氧化DOPA反应方法结果,与空白对照组相比,各浓度NGF组与GSH组Melan-A细胞的形态、增殖、黑素合成和酪氨酸酶活性无显著差别。  形态学观察、MTT法和Annexin-Ⅴ/PI流式双染法结果显示,与空白对照组相比,UVA组、UVA+NGF组增殖率显著下降,凋亡率显著增加,但UVA+NGF组与UVA组无显著差别。与空白对照组相比,UVA组、UVA+GSH组增殖率显著下降,凋亡率显著增加,且UVA+GSH组增殖率与凋亡率在空白对照组与UVA照射组之间。  结论  一定剂量范围内,UVA照射组,随着照射剂量增加、照射后时间延长,Melan-A细胞增殖率显著下降,凋亡率显著增加。  NGF对Melan-A细胞的黑素合成、增殖及凋亡均无显著作用。  GSH对Melan-A细胞的黑素合成、增殖无显著作用,但对UVA导致的Melan-A细胞凋亡有保护作用。
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