腺相关病毒载体介导TRAIL及DR5单链抗体表达治疗肺癌的实验研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bamboo007
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本论文采用基因治疗的策略,研究了腺相关病毒(AAV)载体介导的TRAIL和抗DR5单链抗体的表达在肺癌治疗中的应用。将TRAIL胞外区克隆入AAV载体,构建重组rAAV-sTRAIL病毒载体,并包装获得高滴度的重组病毒。通过比较不同重组AAV亚型病毒侵染肺癌细胞株A549的能力证明AAV2/5亚型病毒对A549肺癌细胞的感染率最强。以AAV2/5作为肺癌基因治疗载体的体外实验证明,重组rAAV2/5-sTRAIL病毒感染A549细胞后,可引起肿瘤细胞凋亡,但对正常人肝细胞无毒性。体内实验证明重组rAAV2/5-sTRAIL病毒可在裸鼠体内表达有活性的TRAIL蛋白,诱发肿瘤细胞凋亡,对肿瘤生长产生明显的抑制效应,并能延长荷瘤小鼠的存活时间,表明AAV载体可介导TRAIL在小鼠体内长期、高效表达,在肿瘤特别是肺癌的基因治疗中具有诱人的前景。 本研究还在我们已制备了一株鼠抗人DR5(TRAIL受体)单克隆抗体AD5-10的基础上,以AAV为载体,构建了能表达带有不同长度连接肽的AD5-10单链抗体的重组AAV表达载体,通过比较研究,筛选出了凋亡诱导活性最强的单链抗体表达载体。肌肉注射该重组病毒后,肺癌Sclc裸鼠皮下移植瘤的生长明显受到抑制,肿瘤细胞凋亡增加,显示了良好的应用前景。本项研究首次利用AAV载体表达抗DR5的单链抗体,证实了其体内外的抗肿瘤活性,可望克服单链抗体在体内半衰期短的缺点,为重组AAV用于抗体的基因治疗提供了新的资料。
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