重组人Dickkopf1蛋白的克隆、表达、纯化及生物学活性的初步测定

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:heyouzhang034
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黑素是皮肤成为褐色的主要色素。黑素是酪氨酸在酪氨酸酶作用下产生的,在黑素细胞的黑素小体中生成,黑素小体从一个黑素细胞被转运至一群角质形成细胞。真、表皮内黑素细胞增生及黑素生成功能活跃是色素增多性疾病的一个主要原因。色素增多性疾病在皮肤科疾病中非常常见,最常见的是雀斑、黄褐斑及炎症后色素沉着,发生在面部、手背等暴露部位显著者严重影响患者的容貌,影响患者的生活质量。根据色素增多性疾病的发病机制,防治措施主要从抑制黑素细胞增殖及活性、防止黑素生成及加速黑素降解等方面入手。目前针对色素增多性疾病防治的各种方法的疗效、复发问题以及可能出现的不良反应,一直是皮肤科临床医师所面临的棘手问题。 人掌跖部位皮肤的黑素含量比非掌跖部位低。近来研究发现,掌跖部位皮肤黑素细胞的密度是非掌跖部位皮肤的1/5,黑素小体、黑素相关蛋白含量也相应的显著降低,其原因为掌跖部位皮肤中的成纤维细胞分泌的Dickkopf1蛋白能够通过抑制黑素细胞Wnt信号转导通路的活化进而抑制黑素细胞的增殖、发育、分化及黑素生成能力。 本课题通过反转录PCR自人掌跖部位皮肤成纤维细胞中获得了编码Dickkop1的32—266位氨基酸的基因,克隆入PQE30质粒,构建了PQE30-dkk1原核表达质粒,经双酶切鉴定及序列分析证实所获序列完全正
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