虾夷扇贝肾脏EST文库构建、标记筛选及Trx基因克隆

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhengziwei5
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虾夷扇贝Mizuhopectenyessoensis是我国北方重要的经济贝类之一。近年来,该种的死亡问题给养殖者带来了巨大的经济损失,其明显滞后的分子遗传学基础研究也阻碍了其遗传改良进程。本文以甄别虾夷扇贝抗逆基因和增加分子标记数量为目的,在建立虾夷扇贝肾脏EST文库的基础上,进行了抗逆基因识别、分子标记筛选和Trx基因表达特性及其重组蛋白的活性研究。   基于SMART技术,构建了虾夷扇贝肾脏组织的EST文库,原始库容为1.2×106PFU,重组率达98%。对该文库的随机测序共得到2919条可用序列,通过比对从中识别出74个抗逆相关基因。   通过对GenBank中七千余条虾夷扇贝EST序列的分析和实验验证,共确定了具有多态性的SSR标记10个和SNP标记15个。经测序,在虾夷扇贝G-型溶菌酶基因部分内含子中比对出了11个SNP潜在位点。   在EST文库信息基础上,克隆了虾夷扇贝两个硫氧还蛋白基因的cDNA全长,其中MyTrx1a基因全长为1508bp,编码104个氨基酸;MyTrx1b基因全长为1336bp,编码106个氨基酸,两者都具有Trx特异功能域-C-G-P-C-。MyTrx1a从囊胚期到担轮幼体期维持最高的转录量,而D型幼体期以后则维持较低水平的转录量;MyTrx1b的转录量在担轮幼体期以前逐渐升高,此后逐渐降低。两个Trx基因在不同组织中的转录量有类似的分布趋势,但其绝对分布量差异显著。注射病原菌后,虾夷扇贝血淋巴中两种Trx的转录量分别于12小时和24小时开始显著上调,说明这两种Trx在抵御ROS的氧化胁迫方面可能起重要作用。重组表达的MyTrx1a和MyTrx1b均具有催化DTT还原胰岛素的活性,其特异还原活性分别为32.31U和17.35U。
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