异育银鲫肠道蛭弧菌BDF-H16的分离与生物学特性研究及其在水产动物病害防治中的应用

来源 :上海水产大学 上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:eyoujin
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蛭弧菌作为一种专门以捕食细菌为生的寄生性细菌,具有噬菌范围广、适应环境能力强等诸多特性,在水产动物病害防治和水质净化方面展现了良好的效果,具有巨大的应用价值。为了有效防治日趋严重的水产动物病害,提高水产品品质,本论文采用自来水双层琼脂平板法首次从异育银鲫肠道中分离到一株蛭弧菌BDF-H16,并对其生物学特性及在水产动物病害防治和水质净化的效果进行了研究。现分别报道如下: 1.异育银鲫肠道蛭弧菌BDF-H16的分离及其部分生物学特性的研究:以一株温和气单胞菌致病菌株作为筛选宿主菌,从异育银鲫肠道中分离到一株蛭弧菌,暂命名为BDF-Hl6。通过光学显微镜、相差显微镜、电子显微镜对蛭弧菌BDF-H16进行了形态观察,并研究了其寄生特性、噬菌范围、最适生长条件(宿主浓度、pH、温度)以及耐盐性。实验结果表明:蛭弧菌BDF-H116为革兰氏阴性菌,杆形或弧杆形,端生一根鞭毛,菌体大小多为0.2~0.5μm×0.8~1.2μm,专性寄生;蛭弧菌BDF-H16对实验所选用的所有革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌均有裂解作用,而对芽孢杆菌无裂解作用;以大肠杆菌为宿主菌,其最佳生长条件为:宿主菌浓度6.75×10<9>cfu/mL、pH7.0~7.5、温度28℃;在含有0.85%~5%NaCl的培养基中能够生长。 2..恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16生长及吸附影响的研究:实验结果表明,2,5,10,20,50μg/mL恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖均具有抑制作用。在固体培养72h后,随着恩诺沙星浓度逐渐增大,蛭弧菌BDF-H16产生的噬斑数目逐渐减少;在液体培养72h后,随着恩诺沙星的浓度逐渐增高,蛭弧菌BDF-H16的增殖浓度不断减少,但10μg/mL恩诺沙星并没有改变蛭弧菌BDF-H16的生长趋势。此外,以沸石作为吸附载体,2,5,10,20,50μg/mL恩诺沙星降低了蛭弧菌BDF-H16吸附量,随着恩诺沙星浓度的增大,蛭弧菌BDF-H16的吸附量逐渐降低,而蛭弧菌BDF-H16的吸附率却在一定恩诺沙星浓度(2~20μg/mL)下却有所升高。 3.不同条件下蛭弧菌BDF-H16对嗜水气单胞菌的裂解效果:探索了不同条件(pH、温度、Ca<++>、Mg<++>、NH<,4><+>、NO<,2><->)下蛭弧菌BDF-H16对嗜水气单胞菌致病菌株W<,1>·L的裂解效果。实验结果表明,蛭弧菌BDF-H16分别在15~33℃、vH5.5~9.0、0~10mmol/L Ca<++>、0~10mmol/L Mg<++>、0~1.6mg/LMS<,4><+>、O~1.0mg/L NO<,2><->条件下均能够裂解嗜水气单胞菌,而且其分别在28℃、pH 7.0~7.5、0.5mmol/L,Ca<++>、0.5mmol/L Mg<++>、0.1mg/L NH<,4><+>、0.30mg/L NO<,2><->条件下对嗜水气单胞菌裂解效果最佳。 4.蛭弧菌BDF-H16对鲫抗嗜水气单胞菌感染的效果:研究了蛭弧菌BDF-H16对嗜水气单胞菌致病菌株W<,1>-L的裂解活性以及蛭弧菌BDF-H16增殖宿主菌--大肠杆菌对异育银鲫的致病性,观察了蛭弧菌BDF-H16对异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的效果。实验结果表明,蛭弧菌BDF-H16对嗜水气单胞菌具有良好的裂解效果,5d后嗜水气单胞菌浓度对数值下降了4.3;BDF-H16增殖宿主菌--大肠杆菌对异育银鲫无致病性;以1.2×10<8>cfu/mL嗜水气单胞菌浸浴感染异育银鲫,蛭弧菌使用浓度及其加入时间对异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的效果有一定影响。蛭弧菌在20.0~2.0×10<4>pfu/mL 浓度范围内对异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染有不同程度的效果,且蛭弧菌浓度增大,异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的效果越好;以2.0×10<4>pfu/mL作为蛭弧菌的使用浓度,随着蛭弧菌加入时间的滞后,异育银鲫死亡率不断升高,异育银鲫对嗜水气单胞菌的抗感染保护率也在不断降低。5.蛭弧菌BDF-H16对乌鳢养殖池水质的影响:以500mL/亩的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度为1.0×10<8>pfu/mL的蛭弧菌BDF-H16制剂,观察了5天内养殖池的pH、DO含量、NH<,3>-N含量、NO<,2><->-N含量、弧菌总数等主要水质指标及乌鳢死亡率的变化。实验结果表明,向乌鳢养殖池加入蛭弧菌BDF-H16后,与对照组相比,试验组ΔNH<,3>-N、ΔNO<,2><->.N及Δ弧菌总数明显减少(p<0.05),ΔDO明显增大(p<0.05),但pH变化不明显(p>0.05);此外,Δ乌鳢死亡率也明显减少(p<0.05)。说明蛭弧菌BDF-H16的加入有利于促进养殖池DO及乌鳢存活率的升高,加快降低养殖池中NH<,3>-N、NO<,2><->-N含量及弧菌总数。 综上所述,蛭弧菌BDF-H16噬菌范围广,对嗜水气单胞菌裂解能力强,对异育眼鲫抗嗜水气单胞菌感染和净化乌鳢养殖水体水质具有良好的效果,可作为优良菌株用于蛭弧菌制剂的开发。
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