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非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精和其他引起继发性肝脂肪变性因素导致肝细胞脂肪变性和肝脏过量脂肪沉积为主要特征的疾病。近年来随着人们生活水平的改善以及饮食习惯的改变,肥胖、非胰岛素依赖性糖尿病、高脂血症、高血压及其相关代谢综合征等发病相继增多,使相当数量人群处于罹患NAFLD的危险之中,其原因主要为非酒精性脂肪性肝病患者发生心脑血管事件的人数显著增多,因此NAFLD正成为我国一个新的重大健康问题,对人类健康和社会发展构成严重威胁,已成为当代肝病领域的新挑战。血液中高浓度的非酯化脂肪酸(NEFA)、炎症以及肝细胞脂肪变性是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的病理特征,其中炎症反应在脂肪性肝病的发生发展中发挥主要作用。已有研究表明白藜芦醇(RSV),一种茋的多酚植物抗毒素物质,具有干预非酒精性脂肪性肝病的炎症反应和肝细胞脂肪变性的作用,但到目前为止上述作用发挥的机制尚不清楚。在非酒精性脂肪性肝病的发生发展环节中炎症反应起重要作用,而核转录因子-κB(NF-κB)与炎症反应的发生密切相关。激活的NF-κB通路可以增加肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1beta(IL-1β)等m RNA的基因转录。TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子能促进外周脂肪分解、肝细胞脂肪变性、炎症、坏死和凋亡,导致NAFLD的发生。RSV可以激活AMP激活蛋白激酶(AMPK)/Sirtuins(SIRT1)通路,以减少脂肪合成相关基因的表达,降低脂质生成,改善肝脂肪变性。但RSV是否通过激活AMPK/SIRT1通路从而抑制NF-κB炎性通路来干预NAFLD的尚不清楚。鉴于RSV对脂肪性肝病的治疗作用,明确RSV干预NAFLD的炎性信号机制,对探寻治疗NAFLD新的原研药物具有重要的理论与实践意义。本研究从三个层面对上述问题加以阐述:1.机体层面:采用高脂日粮(HFD)饲喂,建立NAFLD动物模型,并在饲料中添加30 mg/kg/d RSV。观察肝脏的病理变化,检测血清中NEFA、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、TNF-α、IL-6和IL-1β的含量。并检测肝脏中甘油三酯(TAG)的含量;AMPK/SIRT1通路及NF-κB炎性通路关键因子的表达量;以及TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的表达量。结果显示:(1).饲喂HFD的小鼠表现出严重的肝损伤,脂质沉积和高血液浓度的NEFA、GGT、AST、ALT、ALP和LDH;(2).饲喂HFD抑制肝脏中AMPK/SIRT1通路,诱导NF-κB炎症信号通路蛋白的活化,促进TNF-α、IL-6和IL-1β的高表达;(3).HFD加用RSV饲喂小鼠激活了肝脏中AMPK/SIRT1通路,抑制了NF-κB信号通路蛋白、炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,明显干预了小鼠肝脏脂肪沉积,改善了肝脏炎性损伤。2.细胞层面:通过体外培养小鼠原代肝细胞,添加不同浓度的NEFA细胞模型的建立,结果发现,NEFA处理显著增加肝细胞中p-IκBα/IκBα和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平以及TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子m RNA的转录,表明NEFA可以激活小鼠原代肝细胞中NF-κB炎性通路以及促进促炎因子的转录,继而诱导肝细胞炎性损伤。3.基因信号传导层面:在体外培养小鼠原代肝细胞,加入不同浓度的NEFA细胞模型的基础上,添加RSV(50μM和100μM)以及AMPKα和SIRT1抑制剂(Nicotinamide,Nic和Compound C,Com C),结果发现:(1).在添加RSV处理组,AMPKα磷酸化和SIRT1蛋白表达量显著高于单加NEFA组,表明RSV干预了NEFA对AMPKα和SIRT1表达的抑制作用;(2).添加RSV处理组,NF-κB炎症通路的激活和促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA的转录显著低于单加NEFA组;(3).在添RSV同时加入Com C或Nic组,NF-κB炎症通路的激活以及促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA的转录显著高于NEFA加RSV组,表明抑制AMPKα或SIRT1后进一步减少RSV对NEFA诱导的NF-κB炎症通路过度激活的改善作用。这些数据从另外角度证实RSV通过激活肝细胞中AMPKα/SIRT1通路,干预了NEFA诱导的NF-κB信号通路的活化以及促炎因子的表达,从而改善高浓度NEFA引起的肝细胞炎性损伤。本课题研究从三个层面证实RSV通过激活AMPKα/SIRT1途径,抑制NF-κB炎症通路,减少TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA的转录,从而减少促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,干预了非酒精性脂肪性肝病的发生发展重要环节中的炎症反应,为开发RSV临床应用奠定了理论基础。