【摘 要】
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该研究首先优化了总蛋白抽提方法,构建了清晰的、高分辨率的合成图谱(COMPOSITE MAP),摸索了适合本细胞株的蛋白质染色方法,其低背景、高灵敏度及与质谱兼容的特性是后续的肽
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该研究首先优化了总蛋白抽提方法,构建了清晰的、高分辨率的合成图谱(COMPOSITE MAP),摸索了适合本细胞株的蛋白质染色方法,其低背景、高灵敏度及与质谱兼容的特性是后续的肽指纹图谱(PMF)分析的前提条件.在完成对实验方法的优化后,以EGF刺激24小时后野生型MEF的双向电泳图谱作为对照,与敲除PLC-γ1基因的MEF细胞的双向电泳图谱进行比较,共进行了3次重复实验,获得较好的重复性和可比性.下一步的研究将继续深入探讨Vimentin与PLC-γ1通路的关系,同时使用合成双向电泳图谱(COMPOSITE 2-DE MAP)以比较生长因子刺激后PLC-γ1<+/+>与PLC-γ1<-/->的总蛋白表达差异,力求发现更多的表达差异的信号分子.随后辅以其他手段如酵母双杂交、免疫印迹、免疫共沉淀等更为深入地研究这些信号分子与PLC-γ1的相互调节机制.
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