骨髓间充质干细胞移植治疗慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的疗效观察

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mailyangli
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目的:探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)模型大鼠的治疗效果,为COPD的临床治疗提供更为有效的新思路。  方法:选取10只健康清洁SD大鼠,利用全骨髓贴壁细胞法传代培养BMSCs,并通过特异性表面标记物进行鉴定。另选择健康无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级SD(Sprague Dawley)大鼠80只,雌雄各半,采用熏烟法诱导制备COPD大鼠模型,70d后,通过临床症状、血清炎性因子表达水平及病理形态学变化判断模型。将成功制备的COPD大鼠模型随机分为模型空白组(A组)、多索茶碱组(B组)、BMSCs高剂量组(C组)及BMSCs低剂量组(D组),再随机选取10只健康大鼠作为正常对照组(E组),共5组,每组均含10只大鼠(n=10)。分组后对各组大鼠进行相应处理,B组大鼠灌胃多索茶碱液,以1.64mg/ml/只为单位治疗,每日一次;C组及D组分别移植1×107/ml及1×106/ml BMSCs,20天移植1次,共2次;A组及E组大鼠未作特殊处理,正常饲养。40d后,检测各组大鼠外周血白细胞总数,使用ELISA法检测血清中白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及粒细胞集落刺激因子(Granulocyte-Colony Stimulating Factor,G-CSF)表达水平,同期处死后观察各组大鼠肺组织病理变化,并进行肺组织细胞因子的免疫荧光检测。  结果:  1.外周血中白细胞总数检测:A、B、C、D四组COPD模型大鼠外周血中白细胞总数均高于E组(P<0.05);其中A、B、C、D四组模型大鼠外周血中白细胞总数比较:A、B两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);C、D两组均明显低于 A组(P<0.05),且C组低于D组(P<0.05)。  2.血清中IL-10及G-CSF表达水平检测:  (1)IL-10检测:A、B、C、D四组COPD模型大鼠与E组比较,血清中IL-10表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),四组模型大鼠中,C组高于D组,D组高于B组,B组表达水平较A组升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。  (2)G-CSF检测:A、B、C、D四组COPD模型大鼠血清中G-CSF表达水平均高于E组,差异有统计学意义(P<0.05),四组模型大鼠中,A组大鼠血清中G-CSF表达水平高于B组,B组高于D组,D高于C,差异具有统计学意义(P<0.05)。  3.肺组织病理形态学观察:E组大鼠肺组织肉眼下呈粉红色;镜下可见,肺组织呈现正常生理结构,未见明显炎性细胞浸润。COPD模型组大鼠肺组织肉眼观略显苍白,镜下见,肺部基本结构破坏,肺泡壁破裂,肺泡间互相融合形成肺大泡,并可见明显炎性细胞浸润。治疗后,肺组织病理形态改善,较好的恢复肺泡基本结构,仅见少量炎性细胞浸润,炎症消散,气道粘膜下腺体增生减轻或消失,杯状细胞增生以及粘膜上皮局灶性增生减轻或消失。各实验组大鼠比较,B组、C组、D组大鼠肺组织病理形态较A组大鼠改善,其中C组大鼠较D组明显改善,D组较B组明显改善。  4.组织免疫荧光检测显示:各实验组大鼠进行比较,肺组织中G-CSF、IL-10的表达具有显著差异,与血清中ELISA检测结果一致。  结论:经过BMSCs移植后的COPD模型大鼠外周血中白细胞总数及血清中G-CSF表达水平明显降低,血清中IL-10表达水平明显升高,且损伤部位病理形态明显改善,说明BMSCs对COPD模型大鼠具有显著的治疗效果。
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