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松材线虫在环境不利条件下形成dauer型幼虫，这种dauer型幼虫能够感受传媒昆虫——松墨天牛蛹的存在，向其蛹室聚集并附着在天牛体内，当松墨天牛蛹羽化为成虫之后，松材线虫便借助天牛的飞行移动实现寄主转移，从而引起病害的传播和流行。目前，科学界对松材线虫dauer型幼虫的形成机制尚不清楚，这也为阻止松材线虫dauer型幼虫形成和切断病害流行等特异性的防控技术设置了障碍。因此，本文选择了两个与松材线虫dauer型幼虫形成相关的基因akt-1和daf-8，采用实时定量PCR(qPCR)、原位杂交（in situ hybridization）和显微注射(microinjection)等现代分子技术，系统研究其时空表达特性，并采用RNA干扰(RNAi)技术研究这两个基因在松材线虫dauer型幼虫形成过程中的调控功能，以期为揭示松材线虫Dauer型幼虫的形成机理提供基础。具体研究结果如下: 1.qPCR分析结果显示，akt-1和daf-8基因的表达变化具有高度的一致性，即从胚胎到L2表达量显著增加，L2时的表达量最高，随后逐步下降。这表明akt-1和daf-8基因可能在松材线虫dauer形成之前的L2期启动了insulin/IGF-1信号路径和TGF-β信号路径，在一定程度上抑制dauer型幼虫的形成。另外，成虫期akt-1和daf-8基因在不同性别虫体内的表达量差异显著，雄虫明显高于雌虫，表明akt-1和daf-8基因的表达存在性别差异性。 2.根据qPCR定量分析结果，结合dauer型幼虫的关键发育时间节点，我们选择L2幼虫开展mRNA整体原位杂交实验。研究结果表明，akt-1基因在松材线虫L2幼虫身体中部的消化系统稳定表达，daf-8基因在中食道球及其后部稳定表达。根据该原位杂交的特异性表达部位，结合松材线虫dauer型幼虫的口针和食道严重退化的形态特征，进一步证实akt-1和daf-8基因可能是调控松材线虫dauer型幼虫形成的关键基因。 3.采用In-fusion Cloning技术，将松材线虫akt-1和daf-8基因的启动子克隆到线虫特异表达载体pCFJ90的报告基因mCherry上游，构建松材线虫akt-1和daf-8启动子表达载体，将这两个启动子表达载体显微注射到秀丽隐杆线虫的性腺中，观察其时空表达。结果表明，在胚胎期，akt-1基因在虫体中后部集中表达，而daf-8基因则集中在中食道球附近的神经环(neuronal ring)表达，这与原位杂交的结果高度一致;在幼虫和成虫期，akt-1和daf-8基因在头部和尾部的神经节集中稳定表达。 4.采用RNAi技术干扰不同发育阶段的胚胎（卵6h和卵18h），结果发现akt-1和daf-8基因干扰后松材线虫卵的孵化率显著降低，并且表现出明显的畸形性状，表明akt-1和daf-8基因对松材线虫的胚胎发育也具有重要的调控功能。有趣的是，对dauer型幼虫形成的关键L2幼虫干扰之后，均未见明显的表型变化，这可能是因为松材线虫从正常幼虫向dauer型幼虫转化的过程中，主要是生理代谢水平上的变化，在外部形态上没有明显畸形的表型特征。 5.对L2幼虫干扰之后，进一步采用qPCR技术分析akt-1和daf8基因下游与dauer型幼虫形成相关的其它基因，初步发现daf-12、daf-14、daf-16和exp-2基因的表达量出现了明显的变化，这表明akt-1和daf-8基因可能是通过与这些基因的协同作用，共同调节松材线虫dauer型幼虫的形成。