多肽的合成、分离纯化及巯基氧化反应研究

• 作 者: 王欣
• 发表日期: 2005年期
• 关键词: 固相合成 奥曲肽 反相高效液相色谱

多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。自从Merrifield发明固相法化学合成多肽以来,有关各种活性多肽及蛋白质的化学合成有了很大的发展。本论文采用Fmoc固相合成方法合成了有药用价值的奥曲肽及其它两种小分子五肽,并对多肽进行了分离纯化,研究了还原型奥曲肽中巯基的氧化反应。 论文包括以下四个部分: 1.文献综述:简述了多肽的基础知识、多肽合成的发展史、固相合成多肽的原理,综述了多肽的应用与研究展望、Fmoc固相合成中的耦联方法、色谱在多肽纯化方面的应用以及形成二硫键的氧化方法。共引用文献94篇。 2.采用Fmoc固相合成法,以苯并三哗四甲基脲四氟硼酸盐、二异丙基乙胺和1-羟基苯骈三氮唑为缩合剂;苯酚—乙二硫醇—苯甲硫醚—水—三氟乙酸（5:5:2.5:5:82.5,V/V）为切割试剂,合成了奥曲肽、Phe-Leu-Glu-Glu-Leu及C₁₅H₃₁-CO-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser三种小分子多肽,并对奥曲肽的合成规模进行了放大。经MALDI-TOF mass检测,验证了合成产物的正确性。 3.使用反相高效液相色谱对上述三种小肽:奥曲肽、Phe-Leu-Glu-Glu-Leu及C₁₅H₃₁-CO-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser进行了分离纯化。优化了色谱分离条件,并用色谱及MALDI-TOF mass进行了纯度检测,奥曲肽的纯度为97.8%。 4.研究了还原型奥曲肽分子内的一对巯基的氧化对接反应。分别采用空气氧化法、铁氰化钾氧化法、DMSO氧化法、Cu²⁺氧化法和双氧水氧化法对不同浓度的还原型奥曲肽进行了氧化实验。从氧化速率及氧化效果的方面考虑,发现铁氰化钾氧化法和H₂O₂氧化法对还原型奥曲肽的氧化效果更优。