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目的: 通过建立裸鼠原位大肠癌模型，检测与结肠癌细胞血管新生相关蛋白的表达，同时体外观察蟾毒灵(Bufalin)作用的肿瘤条件培养液对HUVEC细胞的影响，并且构建siRNA-K-Ras，从“Ras/Erkl/2—血管新生”信息传递角度研究Bufalin治疗结肠癌的作用机理。 方法: (1)采用MTT法检测Bufalin对HCT-116的直接杀伤作用，通过Elisa酶联免疫吸附试验检测Bufalin处理肿瘤细胞后对VEGF蛋白的影响。 (2)收集Bufalin、贝伐单抗(Avastin)处理后的肿瘤条件培养液，采用划痕实验、小管形成实验观察各组条件培养液对内皮细胞迁移能力及管腔形成能力的影响。 (3)构建siRNA-K-Ras，采用Western Blot实验检测Bufalin处理后对人结肠癌HCT-116细胞相关蛋白的表达变化。 (4)建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型，观察Bufalin对瘤体体积、体重及裸鼠体重的影响，Elisa酶联免疫吸附实验检测裸鼠血清中VEGF蛋白的表达，免疫组化法检测Ki67和CD31反映增殖与血管形成的情况，检测裸鼠原位瘤瘤体中蛋白的表达。 结果: (1)Bufalin体外作用于HCT-116，24 h、48 h MTT结果显示:Bufalin对结肠癌细胞具有时间浓度双重抑制作用。且同时随着Bufalin药物浓度的增加，细胞培养液中VEGF蛋白的含量明显减少(P＜0.05); (2)6h、12h划痕结果显示，肿瘤条件培养液可以浓度依赖性对内皮细胞的迁移能力具有持续抑制作用(P＜0.001)。Bufal in可浓度依赖性的抑制HUVEC血管形成，与Avastin联合使用有协同抑制作用（P＜0.05） (3)高中低剂量的Bufalin与siRNA-K-Ras均可降低K-Ras、P-ERK、VEGF的表达(P＜0.05)，且随着Bufalin浓度增加，抑制作用更强;对ERK蛋白的表达无影响(P＞0.05)。 (4)Bufalin及与Avastin联合用药组作用裸鼠瘤体后均可抑制K-Ras、P-ERK、VEGF的表达(P＜0.05)，但Bufalin联合用药组与单独用药组抑制作用相差不大。对ERK蛋白的表达无影响（P＞0.05）。 (5)经Bufalin及Avastin治疗的裸鼠瘤体明显变小，瘤体体重明显下降，两单独用药组与两联合用药组抑瘤作用相差不大。裸鼠体重基本没有差异。Bufalin及联合用药组作用的动物血清中VEGF蛋白含量明显下降(P＜0.05)。肿瘤HE染色，联合用药组坏死最明显，而其他脏器组织染色结果显示，各用药组并未出现明显的脏器损害。免疫组化结果显示两联合用药组Ki67蛋白表达、MVD血管形成较单独用药组明显减少。 结论: (1)Bufalin可以时间浓度双重依赖性的抑制HCT-116细胞的生长。 (2)Bufalin可以降低肿瘤条件培养液及裸鼠血清中的VEGF蛋白的含量，抑制内皮细胞的迁移、血管形成。Avastin只可以封闭VEGF的功能不可以降低肿瘤条件培养液的VEGF的含量。 (3)华蟾素(Cinobufotalin)主要通过Bufalin抑制裸鼠结肠癌的血管生成。Cinobufotalin和Bufalin与Avastin联合作用，均可协同降低体外内皮细胞管腔形成能力及体内裸鼠原位结肠癌内微血管密度。 (4)Bufalin通过K-Ras/ERK信号通路抑制K-RAS、P-ERK、VEGF的表达，是其抗结肠癌血管新生的重要机制之一。