论文部分内容阅读
毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)是一类以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力的液相分离分析技术。自20世纪80年代问世以来,其理论、分离模式、仪器和应用始终是高度活跃的研究领域。由于其具有分离能力强、分离速度快、耐用性好和成本低等优点,使其在法医学、医药科学、环境科学、生物技术等诸多领域获得了广泛应用。化学发光(Chemiluminescence,CL)分析是根据化学反应产生的光辐射确定物质含量的一种痕量分析方法。它具有灵敏度高、成本低廉、组装简便、不需要光源,避免了背景光和杂散光的影响等特点。因此,将CE与CL联合使用,可兼具两者优点,具有很大优势。Ag(Ⅲ)配合物([Ag(HIO6)2]5-)是一种新型氧化剂,在碱性介质中可氧化鲁米诺产生化学发光。某些物质可增强或抑制Ag(Ⅲ)配合物与鲁米诺的化学发光强度,在一定浓度范围内其增强或抑制程度与物质的浓度呈良好线性关系,据此可建立标准曲线,求出该物质的实际浓度。本研究就是根据这一原理,建立了毛细管电泳-Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光法同时检测牛奶中4种环境雌激素类(雌二醇,4-壬基酚,己烯雌酚,双酚A)残留以及同时检测人血清中的万古霉素和去甲万古霉素的新方法。本方法成本低廉、操作简便、对环境友好、结果灵敏可靠。第一部分毛细管电泳化学发光法同时检测牛奶中4种环境雌激素类残留目的:建立毛细管电泳-Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光法同时检测牛奶中雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和双酚A的新方法,并应用于牛奶中这4种环境雌激素的分离和测定。方法:雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和双酚A在毛细管中电泳分离后,分别与Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光体系发生反应并对其化学发光信号产生明显抑制作用,在一定浓度范围内,抑制程度与样品浓度呈线性关系,据此建立标准曲线。对实验条件进行优化,得出最佳实验条件为Ag(Ⅲ)配合物浓度为1.0×10-4 mol/L,Ag(Ⅲ)配合物溶液p H值为12.52,其中Na OH浓度为0.04 mol/L,Na2CO3浓度为0.04 mol/L,缓冲溶液的p H值为9.21,其中鲁米诺浓度为3.0 mmol/L,Na2CO3、Na HCO3的浓度均为6mmo/L,分离电压为14 k V,进样时间为6 s。用乙腈除去牛奶样品中的蛋白质并取上清液,氮气吹干、复溶、过滤之后进样分析。结果:在最佳分离检测条件下,雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚的线性范围均为0.5~30μg/ml,检出限均为0.25μg/ml,双酚A的线性范围为0.5~20μg/ml,检出限为0.1μg/ml。雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和双酚A的回归方程分别为ΔI=4.798c+20.477、ΔI=5.2948c+19.616、ΔI=5.8843c+30.847、ΔI=10.2c+29.885,R2分别为0.9982、0.9980、0.9964、0.9965,相对标准偏差RSD分别为2.49%、1.45%、2.33%、2.37%,平均回收率分别为88.68%、90.48%、101.57%、97.18%。结论:建立了毛细管电泳-Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光法同时检测牛奶中雌二醇、4-壬基酚、己烯雌酚和双酚A的新方法,本方法操作简便,仪器成本低廉,对环境友好,效果令人满意。第二部分毛细管电泳化学发光法同时检测人血清中的万古霉素和去甲万古霉素目的:建立毛细管电泳-Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光法同时检测人血清中万古霉素和去甲万古霉素的新方法,并应用于人血清中万古霉素和去甲万古霉素的测定。方法:将血清样品用C18固相萃取小柱进行浓缩和净化,用滤膜过滤之后进样。在优化好的实验条件下,即Ag(Ⅲ)配合物溶液p H值为12.17,浓度为1.0×10-4 mol/L,Na OH浓度为0.05 mol/L,缓冲液中鲁米诺浓度为3.5 mmol/L,Na2B4O7和Na2CO3的浓度分别为17.5 mmol/L和5 mmol/L,p H值为8.94,分离电压为15 k V,进样时间为10 s,对样品进行分析。万古霉素和去甲万古霉素经毛细管电泳分离,分别与Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光体系作用,对其化学发光信号均产生明显的抑制作用,在一定浓度范围内,抑制程度与样品浓度呈线性关系,据此建立标准曲线,求出实际样品浓度。结果:在最佳分离检测条件下,万古霉素和去甲万古霉素的线性范围均为5~80μg/ml,万古霉素的回归方程为ΔI=0.7326c+4.0738,R2=0.9986,去甲万古霉素的回归方程为ΔI=0.6000c+2.000,R2=0.9974。检出限均为2.5μg/ml,RSD分别为3.6%和3.8%。万古霉素的平均回收率为98%,去甲万古霉素的平均回收率为88.29%。结论:建立了毛细管电泳-Ag(Ⅲ)配合物-鲁米诺化学发光法同时检测人血清中万古霉素和去甲万古霉素的新方法,本方法操作简便,仪器成本低廉,对环境友好,效果令人满意。