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目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种定植于胃内的革兰氏染色阴性、螺杆状、微需氧菌,目前全球近50%的人口感染了Hp,在发展中国家,其感染率可达到70%以上。因此,建立无创、便捷、廉价的检测方法对Hp的早期诊断具有重要的应用价值。目前,Hp的诊断方法主要有侵入性和非侵入性,非侵入性因为良好的病人依从性而倍受青睐。而非侵入性方法中,血清学实验在年轻患者中准确性不高,而13C尿素呼吸实验很昂贵,因而有必要寻找一种准确性高、无创、简便、价廉的诊断Hp感染的新方法。由于Hp是经粪-口传播,因此,以ELISA方法检测粪便中Hp抗原(H pylori stool antigen EIA ,HpSA)就成为可能。自从1998年HpSA检测被FDA批准在临床应用后该方法就在世界各国被评价,平均敏感性和特异性可达到90-98%,HpSA检测是一种廉价、实用的方法,不仅适用于治疗前和治疗后的诊断,而且对于各年龄段的儿童准确性均很高。Hp尿素酶B亚单位(urease B unit,UreB)和Hp粘附素A亚单位(Helicobacter pylori adhesin A unit,HpaA)均是位于Hp菌体表面的蛋白,在Hp各菌株中甚至球形体中都保守存在,其中UreB含量较高,占菌体总蛋白2.5-5%,而HpaA蛋白特异性较好,本研究拟通过制备抗Hp尿素酶B亚单位蛋白和鞭毛粘附素蛋白A蛋白的单克隆抗体,对抗体特性进行鉴定,建立夹心ELISA检测体系,对人粪便样本进行检测,为Hp临床诊断奠定基础。方法:1.抗UreB和抗HpaA单克隆抗体的制备采用杂交瘤技术制备抗UreB和HpaA单克隆抗体,对比硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵法、蛋白A柱亲和层析法三种纯化方法对单抗亲和力的影响,从而确定最佳纯化方案。2.抗UreB和抗HpaA单克隆抗体特性的鉴定以非竞争ELISA法测定单抗的亲和常数;以ELISA相加实验初步确定单抗识别的表位;以间接荧光法分析单抗与Hp表面蛋白结合特性,以Western blot鉴定单抗与重组蛋白、Hp标准菌株、Hp临床分离株、Hp球形体的反应性,与肠致病性大肠杆菌、普通变形杆菌、绿脓杆菌、克雷白