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目的：体外分离培养人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells，HDPSCs)，并多角度进行鉴定；研究HDPSCs在羟基磷灰石磷酸三钙(hydroxyaparite-calciumphosphate，HA-TCP)、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(poly lactic acid-polyglycolicacid，PLGA)和聚乙醇酸(polyglycolic acid，PGA)三种支架材料上的粘附与增殖情况。
方法：①收集16-25岁健康成人因正畸或阻生而完整拔除的恒牙，要求无牙体牙周疾病。无菌条件下取出牙髓组织，采用酶消化法及滤网过滤，获得单细胞悬液，有限稀释法进行原代培养，待细胞克隆生长后，传代扩大培养。②采用免疫组织化学方法行波形丝蛋白(Vimentin)和STRO-1的免疫荧光染色，鉴定细胞来源。③矿化培养基诱导培养HDPSCs，镜下观察细胞形态变化，4周后行碱性磷酸酶(alkaline phophatase，ALP)活性测定并采用免疫荧光法检测与HDPSCs矿化相关蛋白-牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)的表达情况。④成脂化培养基诱导培养HDPSCs，3周后行油红O染色。⑤取经过处理无菌的PLGA、PGA和HA-TCP，形状均为3mm×3mm×3mm的立方体，将密度为2×105/mL的HDPSCs接种于三种支架上，继续常规培养，通过扫描电镜(SEM)观察材料表面形态，细胞粘附及基质分泌情况；并分别取2、5、10天的细胞-支架复合体做细胞计数，实验结束后数据用SPSS19.0统计软件处理，采用方差分析对细胞计数结果进行统计学分析。
结果：①采用酶消化法培养HDPSCs，细胞以单细胞方式贴壁生长，24h后镜下见细胞呈长梭形，胞体较小，部分细胞形态不规则呈多角形或椭圆形，核仁清晰；7天后少数细胞生长迅速，呈集落样生长，形成细胞克隆。②本实验所培养的细胞波形丝蛋白表达阳性；表面抗原STRO-1的免疫荧光检测结果显示阳性。③矿化诱导4周后对HDPSCs矿化相关蛋白检测的结果显示：牙本质涎蛋白表达阳性；碱性磷酸酶活性增强。细胞成脂肪化诱导培养3周后，可见部分细胞体积增大，胞浆内有透明脂滴形成，油红O染色为桔红色。④细胞接种2、5、10天，细胞计数和扫描电镜均显示：PGA和PLGA支架材料上的细胞粘附率和细胞数量均显著高于HA-TCP(P<0.05)；细胞在三种支架材料上的增殖力无显著差异(P>0.05)；细胞接种5天，PGA和PLGA支架上有丰富的细胞外基质形成；细胞接种10天，三种支架上均有丰富的基质形成，细胞的生长状态和基质分泌无显著差异。
结论：①本实验所培养的细胞表面抗原Vimentin和STRO-1表达阳性，并具有多向分化潜能，结果表明采用酶消化法可在体外成功培养出HDPSCs。②本实验结果显示在三种支架材料中PGA和PLGA在牙齿组织工程中为较理想的支架材料。