【摘 要】
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目的原核表达幽门螺杆菌26695标准株的感应调节蛋白CrdR，并初步探讨其在酸适应调控中的作用，为从细菌适应环境的生理角度探索抗感染的新途径提供实验材料和实验依据。方法以提
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目的原核表达幽门螺杆菌26695标准株的感应调节蛋白CrdR，并初步探讨其在酸适应调控中的作用，为从细菌适应环境的生理角度探索抗感染的新途径提供实验材料和实验依据。方法以提取的幽门螺杆菌26695标准株基因组DNA为模板，PCR扩增hp1365基因；将其克隆至载体pGEX-6P-1中，构建pGEX-hp1365载体，通过双酶切和DNA测序鉴定后，转化E.coli JM109，IPTG诱导表达；表达产物经SDS-PAGE分析、Western blot鉴定；目的蛋白大量表达后经亲和层析法纯化，免疫家兔制备抗重组CrdR蛋白的兔免疫血清，通过Western blot分析CrdR蛋白在不同pH条件下的表达量，探讨CrdR调节蛋白在幽门螺杆菌酸适应调控中的作用。结果经PCR扩增的hp1365基因全长642bp，与hp1365基因大小一致；重组表达质粒pGEX-hp1365经双酶切和DNA测序鉴定，插入的片段与hp1365基因序列完全一致；SDS-PAGE分析表达的重组蛋白相对分子质量约为25KDa，蛋白含量为60%，以包涵体形式表达；Western blot鉴定为CrdR蛋白；制备了抗重组CrdR蛋白的兔免疫血清；Western blot分析显示，在不同pH培养条件下，幽门螺杆菌CrdR蛋白在pH5的培养基条件下表达量最高，并随着pH增高其表达量呈递减趋势。结论成功原核表达了幽门螺杆菌26695标准株CrdR蛋白，该蛋白在幽门螺杆菌酸适应中起到调控作用，为进一步探讨CrdR的作用机制和通过阻断CrdR抗幽门螺杆菌感染的措施提供了实验材料。
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