论文部分内容阅读
目的： 探讨维生素D（Vitamin D，VD）对TGF-β1诱导的大鼠肺泡II型上皮细胞（RLE-6TN）间质转化的影响。 方法： 体外培养大鼠肺泡II型上皮细胞(RLE-6TN)，分为正常对照组（A）、TGF-β1组(B)、TGF-β1+VD组(C)、TGF-β1+ICG001组(D)、TGF-β1+VD+ICG001组(E)，按TGF-β1 10 ng/ml，维生素D 1μM，ICG001 5μM浓度给药。先用VD、ICG001或VD+ICG001预先处理细胞，培养了1天后往各组中加入TGF-β1。2天后，观察各组细胞在形态学上的改变，并用显微镜拍照记录；Western blotting检测E-钙黏素（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及纤维连接蛋白（Fn）表达水平，Image J软件分析各组蛋白条带的灰度值；Real-time PCR法测定各组细胞Snail的相对表达量。 结果： 镜下正常组RLE-6TN细胞呈典型的铺路石样改变，细胞间连接紧密，而B组细胞形态明显呈梭形改变，细胞间隙明显增大。C组、D组相较B组细胞倾向铺路石样改变，细胞间隙有所缩小。E组细胞则大多呈铺路石样改变，间隙更小，形态接近正常组。Western blotting分析，与正常组α-SMA（0.27±O.04）、Fn（0.36±O.02）、E-cadherin(0.93±O.07）比较，B组α-SMA(0.95±O.05）、Fn（0.82±O.03)表达量显著增多，E-cadherin(0.32±O.08)则显著的减少（P<0.05）。C、D、E各组α-SMA(0.81±O.02、0.80±O.04、0.69±O.06) 、Fn(0.62±O.05、0.65±O.03、0.46±O.08) 表达量较B组减少（高于正常组）， E-cadherin(0.55±O.03、0.57±O.06、0.83±O.08)的表达却相对增多（低于正常组）（P<0.05）。E组与C组和D组比较α-SMA、Fn表达量减少，然而E-cadherin表达量增多（P<0.05）。C组与D组比较E-cadherin、α-SMA 及Fn表达量差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR结果显示，B(3.73±O.08)、C(2.66± 0.07)、D(2.68±0.06)、E(1.72±0.04)组与A组(1.00±0.00)比较Snail表达均上调，C、D、E组与B组比较Snail则表达下调，E组与C、D组比较Snail表达也下调，差异均有统计学意义（P<0.05）。C、D两组组间比较，Snail表达未见显著统计学差异（P>0.05）。 结论： 1、TGF-β1可诱导大鼠肺泡II型上皮细胞发生EMT，β-catenin是TGF-β1介导的EMT途径中重要的信号分子； 2、VD可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺泡II型上皮细胞间质转化； 3、VD+ICGOO1作用可以更强烈的抑制TGF-β1刺激下大鼠肺泡II型上皮细胞的间质转化； 4、VD抑制TGF-β1诱导RLE-6TN的间质转化，机制可能是VD负向调控Wnt/β-catenin信号通路，与ICG001发挥协同作用，起到抗纤维化的效应。