药用放线菌的分离、筛选和系统分类研究

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药用放线菌在过去的半个多世纪已经为人类的健康作出了不可轻估的贡献,今天和将来人们将继续从中受益。生态环境的多样性和物种多样性决定了放线菌次生代谢产物的丰富性。为了研发新的微生物药物以应对日益凸现的耐药现象和卷土重来的结核、HIV等重大疾病,我们必须从改进菌种分离方法着手,深入探索未知放线菌资源,建立快速高效的筛选和识别体系,提高对新物种、新基因的研究和利用水平。 药用放线菌的分离、筛选和系统分类研究以“生态环境多样性→物种多样性→基因多样性→次生代谢产物多样性→用途多样性”为指导,开展了难分离培养放线菌的分离方法的探究,从盐环境、低温环境、近海环境以及药用植物内生和根际环境中分离纯化获得近5000株放线菌,经过活性筛选实验和分子筛选研究,得到了221株具有药用开发潜力放线菌菌株。 脂肪酸谱分析表明,分离筛选到的221株放线菌中有13株可能属于新的分类单元。多相分类研究确定了其中9株药用放线菌的分类地位。具有乙酰胆碱酯酶抑制剂活性的菌株6014为链孢囊亚目(Streptosporangineae)中紧邻于链孢囊科的一个新属,根据菌株的形态特征,命名为中华链孢囊新属(Sinostreptosporangium gen。nov.);具有良好抗菌活性的放线菌菌株I03-9939是束丝放线菌科Actinosynnemataceae)的一个新属,命名为异束丝放线菌属(Alloactinosynnema gen。nov.);具有抗耻垢分枝杆菌活性的耐低温放线菌菌株70185是微球菌科(Micrococcaceae)的一个新属,命名为刘氏菌属(Zhihengliuella gen.nov.);具广谱抗菌活性的放线菌菌株I05-00051,I05-00074T和I03-00808是糖多孢属(Saccharopolyspora)的一个新种,命名为抗微生物糖多孢菌(Saccharopolyspora antimicrobica sp.nov.);菌株6016为皮肤球菌属(Dermacoccus)的一个新种,命名为藤黄皮肤球菌(Dermacoccus luteus sp.nov.);菌株45725和06-2230分别为多形态放线菌属(Actinopolymorpha)的2个新种,分别命名为橙红多形态放线菌(Actinopolymorpha rutila sp.nov.)和根际多形态放线菌(Actinopolymorpha rhizosphera sp.nov.)。 这些菌株的生理生化实验结果显示,应用添加了SOD和catalase等解除氧毒害物质的培养基分离到的菌种对SOD和catalase等物质没有特异依赖性,但是,这些菌株的氮源利用范围比较有限。 通过采用标准方法大量充实已知放线菌脂肪酸数据,应用Sherlock文库生成软件更新了现有放线菌脂肪酸数据库,建立了根据脂肪酸分析来鉴别放线菌的快速识别体系。 脂肪酸分析还发现,根据脂肪酸谱可以把假诺卡氏属菌株分成2个类群;随后,对假诺卡氏属菌株进行了甲基萘醌组分测试,得到了同样的结论。应用16SrRNA基因分析、MLST(多基因位点序列测定)(Multilocus sequence typing)以及AFLP(扩增片段长度多态性)(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)实验结果,对假诺卡氏属菌株进行了系统分类研究,结果显示假诺卡氏属菌株是一大类在表型和基因型上差异较大,但在系统进化上却是密切相关的放线菌。
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