【摘 要】
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目的：双特异单链抗体是基因工程抗体的一种形式，它具有两个抗原结合位点，可选择性募集效应细胞到靶细胞，介导特异性杀伤作用。本实验构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGF
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目的：双特异单链抗体是基因工程抗体的一种形式，它具有两个抗原结合位点，可选择性募集效应细胞到靶细胞，介导特异性杀伤作用。本实验构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3)及亲和活性测定。
方法：设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列，由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中，脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，经G418加压培养两周后，有限稀释法进行克隆化，直接竞争ELISA法筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株。选择高表达的克隆株扩大培养，收集无血清上清培养液超滤浓缩，浓缩产物经Ni-NTA柱纯化，120 g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用流式细胞仪(FCM)检测生物学活性。
结果：bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确。bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达，筛选出6株高表达克隆株，分泌表达量最高为2.5 mg/L，经Nj-NTA柱纯化后的bscVEGFR2×CD3浓度达到1.56 g/L。120g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56000有1条带，与预期相符，Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合。FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合。
结论：成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体，该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性，为以后的抗体功能实验奠定了基础。
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