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H5N1 亚型禽流感病毒（Avian influenza viurs H5N1 subtype,AIV H5N1）作为一种高致病性的流感病毒而备受社会的关注。目前,在国内外灭活苗一直是防控禽流感的主要手段。但灭活苗免疫效果不理想,不能高效诱导T细胞免疫,不能区分自然感染和疫苗免疫产生的抗体,而且在禽流感灭活苗制备时有散毒风险。因此,研制安全、高效的新型疫苗已成为当务之急。病毒活载体疫苗能高效表达病原的保护性抗原。不仅如此,其诱导机体产生体液免疫的同时,亦诱导产生高效细胞免疫,从而可以达到有效清除抗原的目的。病毒活载体疫苗已成为当前新型疫苗的研究热点。鸭瘟病毒（Duck enteritis virus,DEV）作为疱疹病毒中的一员,具有较大的基因组结构（基因组大约为158Kbp）,而且包含许多生长非必需的基因序列,这些基因序列的删除与替换并不影响DEV的生长特性。而且鸭瘟弱毒疫苗是一种广泛应用的疫苗。由于DEV的上述特性,可作为表达外源基因的载体病毒。为了使重组DEV活载体疫苗的研制更为简便高效,本实验室构建了 DEV的细菌人工染色体（Bacterial Artificial Chromose,BAC）,并以之为基础,将合成的带有pMCMV启动子的HA表达盒插入DEV BAC的UL55和LORF11之间的非编码区,构建成重组DEV BAC（pDEVC-KCE-H5（UL55））。随后通过比较重组BAC（pDEVC-KCE-H5（UL55））与亲本BAC（pDEVC-KCE）的基因图谱进行鉴定,结果与预期一致。然后,我们将带有上、下游同源臂且含有gC基因的片段与pDEVC-KCE-H5（UL55）的DNA通过共转染CEF的方法成功拯救出恢复了 gC基因的重组毒——DEV-H5（UL55）,并且证明DEV-H5（UL55）的生长特性与亲本毒（DEVC-KCE）无显著的差异。将DEV-H5（UL55）接种CEF通过间接免疫荧光和Western Blotting证明外源基因（HA）能够稳定地表达。对构建好的重组毒的生物学特性进行相关的研究及验证后,进行了动物实验。结果表明,仅用106 TCID50的DEV-H5（UL55）免疫接种商品鸭就可对DEV强度攻击产生100%的免疫保护。而在免疫3周龄商品蛋鸡体内亦检测到HI滴度,其峰值达8.2log2。然而当对 1 周龄 SPF 鸡接种 106TCID50 DEV-H5（UL55）却导致了 60%（6/10）的死亡率,此外,即使对商品鸭接种107 TCID50DEV-H5（UL55）,其诱导产生的HI效价也很低。通过本研究可以得到以下结论:（1）本实验中所构建的BAC含有DEV vaccine strain C-KCE株的全基因组;（2）HA基因插入到UL55和LORF11之间不会影响DEVC-KCE的生长特性;（3）DEV-H5（UL55）能对鸭瘟产生100%免疫保护;（4）尽管DEV-H5（UL55）对1周龄SPF鸡有一定的毒力,但能诱导3周龄商品鸡产生较强的体液反应;（5）DEV-H5（UL55）诱导商品鸭产生的HI效价较低。