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目的:将人类牙龈间充质干细胞(Gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)系统移植到小鼠牙周炎模型中,观察牙龈间充质干细胞在小鼠牙周炎模型体内的归巢和分化情况,并评价其对牙周炎的治疗作用。方法:通过酶消化法从人类牙龈组织中分离GMSCs,采用克隆形成率实验、成骨成脂诱导分化实验、流式细胞术对细胞的干细胞特性进行鉴定,并使用携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的慢病毒转染标记细胞。36只C57BL/6J8周龄小鼠随机分为A、B两组,丝线结扎两组小鼠上颌第二磨牙建立牙周炎模型,通过尾静脉将带有GFP标记的细胞移植入A组小鼠体内,B组则注射等量无血清的α-MEM培养基。系统移植后1、2、4周两组分别处死6只小鼠,经多聚甲醛内外固定后,截取带有上颌磨牙的两侧牙槽骨。左侧上颌牙槽骨煮沸去除软组织,经亚甲蓝染色后体式显微镜下拍照,软件测量釉牙本质界至牙槽嵴顶的距离,进行统计学分析。右侧上颌牙槽骨10%EDTA浸泡脱矿,包埋切片。苏木素-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色、马松三色(Masson’s Trichrome,MT)染色后在光学显微镜下观察上颌第二磨牙区的组织学变化。切片脱蜡水化后,抗GFP免疫组化染色及DAPI染液细胞核染色观察GFP标记的细胞在小鼠体内迁移和分化情况。结果:利用酶消化法成功从人类牙龈组织中分离获得牙龈间充质干细胞,并且获得细胞可以形成克隆集落,在特定诱导条件下可以向成脂、成骨方向分化,流式细胞术检测细胞高度表达间充质干细胞标志物CD73、CD90、CD105,造血干细胞标志物CD45则不表达。成功使用带有GFP的慢病毒转染GMSCs,转染后的细胞GFP表达率在90%以上。丝线结扎小鼠上颌第二磨牙4周后,可以形成明显的牙周组织破坏,证明牙周炎模型建立成功。体式显微镜拍照测量分析,细胞移植4周后A组上颌第二磨牙6个定点釉牙本质界到牙槽嵴顶的距离小于B组(P<0.05)。HE和MT染色显示,移植细胞1、2周后A、B两组牙槽骨高度极低,且牙槽骨为蓝染幼稚骨。移植后4周,两组牙槽骨高度显著提升,A组牙槽骨高度显著明显高于B组,且A组红染成熟骨较B组多。荧光显微镜观察和免疫组化染色分析可见移植细胞后1、2周上颌第二磨牙牙槽骨与牙骨质间可见GFP+细胞,多呈成纤维细胞状;移植4周后牙槽骨边缘骨陷窝处可见GFP+成骨细胞。结论:酶消化法从牙龈组织中分离GMSCs操作简单,容易掌握,获得的细胞经鉴定具有干细胞的特性。携带GFP基因的慢病毒可以有效感染GMSCs,感染后的细胞能够稳定持久表达GFP,并于体外大量扩增。经尾静脉系统移植的GMSCs可以归巢至牙周炎病损区并可分化为牙周膜细胞及成骨细胞促进牙周组织的再生。