【摘 要】
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该实验以广东菲牛蛭和海南新种牛蛭为材料,利用其基因组DNA作为模板,与通过比较已发表蛭素基因序列的保守性和同源性设计的一对引物进行聚合酶链反应,以广东菲牛蛭 得到特异
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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该实验以广东菲牛蛭和海南新种牛蛭为材料,利用其基因组DNA作为模板,与通过比较已发表蛭素基因序列的保守性和同源性设计的一对引物进行聚合酶链反应,以广东菲牛蛭 得到特异的一条近700bp的DNA片段,其大小和已发表的马尼拉菲牛蛭蛭素基因相近.将该片段在低熔点琼脂糖凝胶上电泳,切块回收,通过纯化得到的DNA和克隆载体pGEM-T vector连接,得到的产物转化感受态大肠杆 DH-5α以IPTG-Xgal蓝白菌落筛选办法初步认定转化子,进一步经过酶切鉴定和PCR鉴定,确定真正的重组菌落.利用细菌的快速繁殖使带有外源基因的质粒大量增殖以达到基因扩增的目的.该研究成功地克隆了广东菲牛蛭蛭素基因,该基因全序列的测定为将来尝试该基因的表达提供了依据,为该种蛭素多肽的研究和最终临床应用奠定了基础.
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