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挥发油是一类天然的透皮促进剂,常具有明显的促透皮作用。草豆蔻、草果和白豆蔻是挥发油含量较高的芳香化湿类中药,具有镇痛、解热、平喘及抗真菌等作用;颅痛定、雪上一枝蒿总碱(主含雪上一枝蒿甲素)及士的宁是具有镇痛抗炎作用的生物碱,外用具有活血散瘀止痛的功效,但单独应用皮肤透过量均较低,为此本课题主要考察了草豆蔻、草果、白豆蔻挥发油对颅痛定、雪上一枝蒿总碱及士的宁经小鼠和裸鼠皮肤渗透的影响。主要研究内容如下:
1.挥发油的提取及主要化学成分的测定
采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,并通过GC-MS鉴别其成分并测定含量。结果草豆蔻油收率为0.7%(ml/g),检出16种主要化学成分,主要有芳樟醇28.67%、β-蒎烯7.69%、癸醇7.24%;草果油收率为3.5%(mug),检出15种主要化学成分,主要有1,8-桉叶素45.38%、香叶醇9.89%、乙酸香叶酯5.67%:白豆蔻油收率为5%,检出12种主要化学成分,主要有1,8-桉叶素78.1%、B.蒎烯9.65%、α-蒎烯2.43%。
2.小鼠脱毛方式的筛选。
采用8%硫化钠、脱毛膏和剃须刀3种脱毛方法进行脱毛方法的筛选,以颅痛定为模型药进行透皮实验,采用UV法测定接受液中的药物含量。实验结果表明:脱毛膏是一种相对较为方便、省时的脱毛方法且性质柔和,对皮肤刺激性小。因此,在今后的实验中选择该法对小鼠进行脱毛。
3.草豆蔻、草果和白豆蔻挥发油体外促透皮作用分别采用改良的Franz扩散池进行体外透皮实验,以氮酮为阳性对照。
(1)对颅痛定的促透效果考察
分别采用改良的Franz扩散池进行体外透皮实验,以氮酮为阳性对照。对颅痛定的促透效果考察
考察了1%、3%、5%、7%、10%等5种浓度的3种挥发油对颅痛定的促透效果,采用紫外分光光度法与HPLC法测定颅痛定含量。结果表明同系列中3%草豆蔻、草果和白豆蔻挥发油体外促透皮作用研究氮酮、7%草豆蔻油、7%草果油、3%白豆蔻油对颅痛定的促透最较好。
以小鼠皮肤为透皮屏障时,3%氮酮、7%草豆蔻油、7%草果油、3%白豆蔻油对15mg/ml颅痛定的12h平均累积渗透量(Q12,μm2)分别为1958.77,3972.14,5531.73,1615.26;12h增渗倍数(ER)分别为1.21,1.25,1.39,1.92。经t-检验,与阴性对照组相比7%草果油和3%白豆蔻油的差异具有显著性意义(P≤0.05)。其中,7%草果油的ER高于3%氮酮,但差异无统计学意义(P>0.05)。以裸鼠皮肤为透皮屏障时,Q12分别为487.88,721.29,1013.41,386.53:12h的ER分别为3.54,7.42,5.24,2.92,可见3种挥发油对颅痛定的均有不同程度的促渗效果。3种挥发油在裸鼠皮肤上比小鼠皮肤促透效果更明显,虽然其Q12较低而ER却有明显增加。经t-检验,与阴性对照组相比7%草豆蔻油和7%草果油的差异具有显著性意义(P≤0.05),与氮酮相比7%草果油差异具有显著性意义(P<0.05)。
(2)对雪上一枝蒿甲素的促透效果考察
考察了1%、3%、5%、7%、10%等5种浓度不同挥发油对一枝蒿总碱中一枝蒿甲素含量的促透效果,采用HPLC法测定一枝蒿甲素含量。结果表明同系列中3%氮酮、5%草豆蔻油、7%草果油、7%白豆蔻油对雪上一枝蒿甲素的促透效果较好。
以小鼠皮肤为透皮屏障时,3%氮酮、5%草豆蔻油、7%草果油、7%自豆蔻油对40mg/ml雪上一枝蒿甲素的Q12分别为1356.44,1674.94,1695.62,1411.15;12h时促渗剂的增渗倍数(ER)分别为2.09,2.78,3.02,2.3。与阴性对照相比,5%草豆蔻油差异具有非常显著性意义(P<0.01),7%草果油和7%白豆蔻油差异具有显著性意义(.P<0.05)。以裸鼠皮肤为透皮屏障时,Q12分别为312.45,399.01,409.34,522.49;12h的ER分别为3.64,4.43,4.51,5.8,该4种促渗剂组与阴性对照相比差异均有显著性意义(P<0.05)。表明3种挥发油均能明显促进雪上一枝蒿甲素的透皮吸收,其促渗效果均比氮酮好。
(3)对士的宁的促透效果考察
考察了1%、3%、5%、7%、10%等5种浓度不同挥发油对士的宁的促透效果,采用。HPLC法测定士的宁的含量。结果表明同系列中结果表明以3%氮酮、7%草豆蔻油、5%草果油及5%白豆蔻油对9mg/ml士的宁的促透效果较好。
以小鼠皮肤为透皮屏障时,3%氮酮、7%草豆蔻油、5%草果油及5%白豆蔻油对9mg/ml士的宁的Q12分别为1420.06,1948.65,1716.21,.1359.41;12h的ER分别为1.58,1.99,1.75,1.42。3种挥发油与阴性对照组相比,7%草豆蔻油和5%草果油差异具有非常显著性意义(P<0.01),5%白豆蔻油差异具有显著性意义(P<0.05)。以裸鼠皮肤为透皮屏障时,Q12分别为233.6,458.9,429.9,484.O;ER.分别为8.91,20.78,17.48,18.87。3种挥发油与阴性对照组和氮酮相比,差异均具有非常显著性意义(P<0.01)。表明3种挥发油均能有效促进士的宁的透皮吸收,其中草豆蔻的促透效果最好。
4.草果油中主成分1,8-桉叶素经裸鼠体外的促透皮作用。
考察草果油与白豆蔻油中主要成分1,8-桉叶素(1,8-CN)对颅痛定、雪上一枝蒿甲素及士的宁经裸鼠体外皮肤渗透的影响。结果表明3%氮酮、.3.2%、7%1,8-CN对15mg/ml颅痛定的Q12分别为346.3,655.8,675.2;ER分别为1.85,3.58,3.71;对40mg/ml雪上一枝蒿甲素的Q12分别为3223.5,415.6,423.0μg/cm2,ER分别为1.99,2.35,2.38;3%氮酮、2.3%、5%1,8-CN对9mg/ml士的宁的Q12分别为231.1,67.8,90.2,ER分别为12.13,1.73,5.07。可见,1,8-CN能明显促进这3种生物碱的透皮吸收。1,8-CN对3种生物碱的Q12:均高于阴性对照组,与阴性对照相比差异均有非常显著性意义(P<0.01);’与氮酮相比:1,8-CN对颅痛定促渗差异有非常显著性意义(P<0.01),对另两种生物碱促渗差异无统计学意义(P>0.05);且对士的宁的促透作用不如氮酮。草果挥发油中主成分对3种生物碱的促透效果均不如草果挥发油。
5.3种挥发油促渗机理的研究。
采用差示扫描量热分析方法(DSC)和扫描电镜考察5%草果油及单体的透皮吸收机理。DSC法结果显示未经处理的裸鼠皮肤角质层与用促透剂(氮酮、5%草果油及1,8-CN)处理后的角质层均有4个吸热峰,峰形略有变化,且促透剂处理后各峰均有不同程度的提前;而除类脂角质层只有一个峰,其余峰均消失。5%草果油及单体的促透机理可能与瓦解角质层的双分子脂质层的紧密结构,流度增加有关。提示这两种促渗剂对角质层类脂质可能具有特异的溶解作用。
采用扫描电镜进一步对小鼠皮肤表面的超微结构观察,证实了5%草果油及单体对双分子脂质层的影响。结果显示挥发油使皮肤表面不连续性及裂隙增加,毛囊口拓宽,对皮肤有脱水作用,而氮酮表现为亲水膨胀作用,1,8-桉叶素表现为皮肤细胞更加疏松、胞间裂隙增大、表面溶解、表层出现明显的松泡和崩解现象。从而使屏障阻力降低,药物渗透速率增加。