【摘 要】
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在本实验室前期构建的辽宁绒山羊毛囊兴盛期cDNA质粒文库中,经拼接测通后得到了辽宁绒山羊proteasome maturation protein(POMP)基因序列,旨在研究辽宁绒山羊PMOP基因在毛囊
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在本实验室前期构建的辽宁绒山羊毛囊兴盛期cDNA质粒文库中,经拼接测通后得到了辽宁绒山羊proteasome maturation protein(POMP)基因序列,旨在研究辽宁绒山羊PMOP基因在毛囊发育与绒毛生长中的作用。首先对POMP基因进行生物信息学分析,然后利用原位杂交技术对其进行定位分析;RT-PCR检测POMP基因在心、肝、肾、肺、脾、皮肤中表达信号;Real Time PCR检测该基因在毛囊发育的三个阶段的表达以及加入外源褪黑激素和FGF5以及IGF-1三种因子对辽宁绒山羊成纤维细胞进行培养后细胞中POMP基因的表达量变化。实验结果如下:生物信息学分析表明,辽宁绒山羊POMP基因全长1278bp,编码141个氨基酸,该蛋白基因与牛属同源性最高;原位杂交结果显示,在初、次级毛囊中,POMP在内根鞘中表达强烈,在皮质层、角质层以及髓质中也存在表达,外根鞘中未出现表达信号;RT-PCR显示,POMP基因在心、肝、肾、肺、脾、皮肤中均有表达;Real Time PCR检测结果显示,在辽宁绒山羊绒毛生长兴盛期和退行期,POMP基因次级毛囊中的表达量均高于初级毛囊中的表达量;外源褪黑激素、FGF5以及IGF-5细胞因子分别处理成纤维细胞结果显示,分别加入外源褪黑激素和IGF-1后POMP基因表达量低于对照组,加入10^(-5)g/L外源FGF5在处理羊成纤维细胞24小时后,POMP基因的表达量高于对照组。此外,褪黑激素和FGF5协同处理细胞后POMP的表达量低于对照组,褪黑激素与IGF-1协同作用于成纤维细胞后POMP基因表达量高于对照组。结论:POMP基因普遍存在于辽宁绒山羊各组织器官中,且参与调控初、次级毛囊发育的过程;外源褪黑激素和IGF-1能够抑制POMP基因的表达;10^(-5)g/L外源FGF5作用于羊成纤维细胞24小时,可提高POMP基因的表达;褪黑激素和FGF5协同可抑制POMP基因的表达,而褪黑激素与IGF-1协同作用可提高该基因的表达量。本实验为进一步研究POMP在辽宁绒山羊绒毛生长中的遗传作用机制提供了一定的理论基础。
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