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目的应用基因转染技术,体外检测miR210基因诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和成血管方向分化的作用,探索目的基因双重调控作用,为将来修复骨缺损打下基础。方法体外培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测BMSCs表面标志物;构建慢病毒载体Lenti-miR-210和Lenti-Lac Z,并分别用Lenti-Lac Z和Lenti-miR-210转染BMSCs,并在转染后的3~5d在倒置荧光显微镜下观察病毒转染效率;应用MTT法检测病毒对BMSCs增殖率的影响,并在目的基因转染BMSCs的第0天、第1天、第4天、第7天、第14天和第21天分别提取m RNA和蛋白,利用RT-PCR和Western blot检测关键性成血管和成骨因子的表达。同时目的基因转染第21天,通过碱性磷酸酶(ALP)和钙结节茜素红染色观察体外骨形成的情况。检测结果均以均数±标准差表示,使用SPSS统计软件对数据进行分析,P<0.05为有统计学差异结果倒置相差显微镜下观察细胞形态为梭形,旋涡状生长,流式细胞仪分析显示,BMSCs间充质干细胞表面抗原CD44、CD90高度表达,造血干细胞表面抗原CD34和CD45表达阴性,推断出所培养的细胞为骨髓间充质干细胞。当感染复数(MOI)=10时,BMSCs的转染效率最高,且病毒对BMSCs增殖能力无显著影响,在病毒转染后的5d,倒置荧光显微镜观察,病毒转染效率均在90%以上,MOI=10时,病毒对细胞的增殖无显著影响(P>0.05);RT-PCR结果显示,目的基因转染的第4天、第7天、第14天和第21天,miR-210能够显著上调BMSCs关键性成骨和成血管因子的表达(P<0.05);Western blot检测结果显示,蛋白表达与m RNA的表达趋势几乎一致。ALP和茜素红钙结节表达的检测结果显示,相较BMSCs组及Lenti-Lac Z/BMSCs组,Lenti-miR-210/BMSCs组ALP和钙结节表达显著提高。结论以慢病毒为载体的miR-210能够成功转染至BMSCs中,并在细胞中能够高效持续的表达成骨、成血管因子。miR-210可以显著促进BMSCs向成骨和成血管方向分化,这为将来的体内实验奠定了基础。