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目的:血浆中存在稳定的并可以反映血小板被激活情况的特异性microRNAs,具备作为冠心病等疾病的生物标记物潜能。我们前期研究也发现,血浆miR-126可能是潜在的预测经皮冠状动脉介入治疗PCI术后冠心病患者心脏主要不良事件的生物标记物。本课题旨在通过对氯吡格雷药动学/药效学实验寻找与氯吡格雷药物效应有关的miRN As,用miRNAs对PCI术后冠心病患者服用氯吡格雷后在随访期内,发生主要不良心血管事件MACE的风险率和次要终点出血事件发生率进行预测评估,探讨血浆循环miRNAs是否可以作为评估氯吡格雷抗血小板疗效个体差异的生物标记物。方法:(1)筛选与氯吡格雷药效有关的miRNAs:首先设计系列预实验来建立、优化血浆miRNA提取和定量检测的方法;入选诊断为冠心病的患者153例,服用氯吡格雷首剂300 mg负荷剂量以及阿司匹林100 mg后,用VerifyNow抗血小板治疗监测系统检测血小板集聚率ARU、PRU,根据检测结果分组并组成血浆样本池,提取血浆总RNA;运用illumina高通量测序检测并筛选在组间差异表达的miRN As;然后基于特异性茎环引物qRT-PCR方法,验证和筛选的这些miRNAs在样本池间的表达;同时也通过qRT-PCR方法在每个单独患者血浆样本间检测筛选到的miRNAs表达水平,用Spearman相关分析方法统计血浆循环miRNAs与氯吡格雷药效学(血小板聚集率PRU)的相关性;(2)用所筛选miRNAs预测氯吡格雷药动学效应:入选另一诊断为冠心病的人群31例,服用氯吡格雷首剂300 mg负荷剂量以及阿司匹林100 mg,进行氯吡格雷药代动力学考察以及服药前血浆miRNAs检测,分析miRNAs表达水平与氯吡格雷活性代谢产物MP-H4药代动力学PK参数(Cmax、AUC0-4h、Tmax)的相关性与预测性;(3)在前瞻性队列验证miRNAs与心血管不良事件的影响:入选诊断为冠心病,并且服用氯吡格雷联合阿司匹林抗血小板治疗的患者1230例,作为独立的前瞻性研究队列,进行为期三年的随访调查,同时采集患者入院后服药前的血浆,检测所筛选到的mirnas的表达水平,运用cox回归或logistic回归模型分析临床基线特征资料和血浆mirnas表达水平分别与患者随访期内发生主要终点mace事件和次要终点出血事件风险的关系,筛选能够预测氯吡格雷抗血小板疗效个体差异的中间指标。结果:(1)本实验建立和优化的对血浆mirnas定量分析的qrt-pcr方法有效可行。通过illumina建库测序检测筛选到17个在组间差异表达的mirnas。其中,在血浆样本池间验证得到与测序结果相一致的有6个mirnas(mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-106a、mir-21、mir-142)。并且,这6个血浆mirnas中mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-142在氯吡格雷抵抗人群中表达上调(p<0.05)。在发生阿司匹林抵抗时,mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a在氯吡格雷抗抵抗人群中表达显著升高(p<0.05)。(2)在氯吡格雷药代动力学研究中,运用错误控制方法fdr对p值进行多重检验校正后发现,患者服药前血浆mir-142的表达水平与mp-h4cmax和auc0-4h显著负性相关(p<0.05)。(3)在前瞻性队列研究中,较高的mir-142和mir-126的表达水平与该患者接受氯吡格雷抗血小板治疗后mace事件高发生率显著相关(p值分别为0.0006、0.0353)。多因素cox回归分析显示,血浆mir-142表达水平、合并疾病糖尿病、心衰以及使用钙离子通道拮抗剂是患者在氯吡格雷用药后随访期内发生mace风险率的独立影响因素(p值均<0.05)。另外,血浆mir-21、mir-27a、mir-106a、mir-126、mir-130a和mir-142的表达水平,与患者服用氯吡格雷后在随访期内发生或不发生出血事件无明显关联性。结论:血浆mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a可能是反映氯吡格雷抗血小板药物效应的潜在中间指标。在pci术后服用氯吡格雷的冠心病患者中,血浆mir-142表达水平与糖尿病、心衰和合并使用钙离子通道阻滞剂都是引起mace的独立风险因素。基于对miR-142与氯吡格雷药动/药效学的相关研究证明,血浆miR-142可以作为评估其抗血小板药物效应个体差异以及预测临床终点事件的生物标记物。