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目的：
通过组织病理学和Tunel细胞凋亡检测法,研究11月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)模型小鼠视网膜组织结构的病理改变,探讨AD转基因小鼠视网膜是否存在退行性变。
方法
1、11月龄APP/PS1双转基因AD模型雌性小鼠6只,同月龄同背景非转基因雌性小鼠6只做为正常对照。两组小鼠经双侧上丘(optic nerve layer of thesuperior colliculus,OP)注射30％辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)。
2、小鼠存活48小时后灌注处死,完整分离脑,沿脑冠状面做冰冻切片(厚20μm),行刚果红染色,检测老年斑(senile plaques,SP)。
3、完整取出右眼球行视网膜铺片,行视网膜HRP组织化学反应,计算机图象分析系统对RGC进行计数。
4、完整取出左眼球做石蜡切片,一部分视网膜常规HE染色,行视网膜各层神经细胞计数。一部分行Tunel检测,行视网膜凋亡细胞计数。
结果:
1、脑组织刚果红染色:AD模型组小鼠海马出现老年斑,正常对照组海马未见老年斑,证明APP/PS1双转基因AD模型小鼠具备阿尔茨海默病的病理变化。
2、HRP逆行标记视网膜神经节细胞:对照组与模型组视网膜神经节细胞计数分别是112.78±7.70,78.72±11.35,两组视网膜神经节细胞比较,模型组视网膜神经节细胞减少p<0.01,有显著性差异。
3、视网膜HE染色各层细胞计数:对照组与模型组视网膜神经节细胞数分别是8.17±1.17,5.17±0.75；内核层细胞分别为31.17±4.50,30.50±6.0；外核层细胞91.67±25.74,86.17±6.97；两组视网膜神经节细胞比较,模型组视网膜神经节细胞减少p<0.01,有显著性差异；两组内颗粒层和外颗粒层分别进行比较,p>0.05无显著性差异。
4、视网膜凋亡细胞计数:对照组与模型组视网凋亡细胞数分别是6.00±1.73,13.25±2.75；两组视网膜凋亡细胞比较,模型组视网膜凋亡细胞增加p<0.05,有显著性差异。
结论:
HRP逆行标记视网膜神经节细胞提示AD模型小鼠视网膜神经节细胞减少；视网膜HE染色可见.AD模型小鼠视网膜细胞减少,以神经节细胞减少为主；Tunel检测提示AD模型小鼠视网膜凋亡细胞数量增加。以上各项实验结果提示11月龄APP/PS1双转基因AD模型小鼠存在视网膜退行性变。