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目的:1、观察新型的GLP-1/GIP双受体激动剂对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型的运动障碍、神经炎症反应及神经营养因子释放的影响;2、比较新型的GLP-1/GIP双受体激动剂DA3-CH与GLP-1单受体激动剂Liraglutide对于帕金森病小鼠模型的保护作用。方法:C57bl/6雄性小鼠随机分为4组,每组10只:(1)对照组(Control组):给予生理盐水腹腔注射(0.2ml/日);(2)MPTP模型组(MPTP组):腹腔注射MPTP(25mg/kg/日);(3)DA3-CH组:在腹腔注射MPTP(25 mg/kg/日)的基础上,30分钟后腹腔注射DA3-CH(25nmol/kg/日);(4)liraglutide组(利拉鲁肽组),腹腔注射MPTP(20 mg/kg/日)基础上,30分钟后给予Liraglutide(25nmol/kg/日)再次腹腔注射。按照上述给药方案,连续处理7日,在此期间对小鼠进行体重监测、血糖监测、转棒实验、悬挂试验行为学检测。第8日将小鼠处死并提取脑组织,采用免疫组织化学方法对小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)标记的多巴胺能神经元、离子钙接头受体分子-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1,IBA-1)标记的小胶质细胞、胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)标记的星型胶质细胞、胶质细胞源性神经营养因子(Glial Derived Neurotrophic Factor,GDNF)标记的阳性细胞进行计数,并对纹状体区TH标记的多巴胺神经纤维阳性区域进行光密度值分析。使用Western Blot方法检测各组小鼠脑内TH、IBA-1、GFAP、GDNF的蛋白表达。结果:1.行为学检测结果:1.1.一般情况观察:MPTP模型组较正常组小鼠自主活动减少、有竖尾立毛现象、有较明显的肢体震颤、行走不稳;DA3-CH组及Liraglutide组较MPTP模型组小鼠自主活动多、无竖毛现象出现、偶可见竖尾行为、无明显肢体震颤、行走不稳现象。1.2.体重及血糖监测:当监测实验期间的血浆葡萄糖水平和体重时,发现各组之间葡萄糖水平及体重没有明显差异(p>0.05)。1.3.在转棒实验及悬挂实验中,DA3-CH及Liraglutide均可改善MPTP导致的小鼠运动功能障碍(p<0.001),且DA3-CH效果更加显著(p<0.001)。2.免疫组织化学染色结果:2.1.TH阳性神经元及神经纤维数量:给以MPTP腹腔注射后,与对照组对比,黑质区TH阳性多巴胺能神经元及纹状体区TH阳性多巴胺神经纤维数目明显减少,差异显著(p<0.001);DA3-CH组及Liraglutide组黑质区TH阳性多巴胺能神经元细胞数及纹状体区TH阳性多巴胺神经纤维均高于MPTP组(p<0.001);DA3-CH组黑质区TH阳性多巴胺能神经元细胞数及纹状体区TH阳性多巴胺神经纤维明显高于Liraglutide组(p<0.001)。2.2.IBA-1阳性细胞数:MPTP模型组与对照组相较,黑质区IBA-1阳性细胞数目明显增多(p<0.001);经DA3-CH及Liraglutide治疗后,黑质区IBA-1阳性细胞数减少(p<0.001);而DA3-CH组黑质区IBA-1阳性细胞数明显少于Liraglutide组(p<0.001)。2.3.GFAP阳性细胞数:与对照组相较,MPTP模型组黑质区GFAP阳性细胞数目均明显增多(p<0.001);DA3-CH组及Liraglutide组比MPTP模型组黑质区GFAP阳性细胞数减少(p<0.001);DA3-CH组黑质区GFAP阳性细胞数明显少于Liraglutide组(p<0.001)。2.4.GDNF阳性细胞数:MPTP模型组与对照组比较,黑质区GDNF阳性细胞数目均明显减少(p<0.001);DA3-CH组及Liraglutide组GDNF阳性细胞数明显高于MPTP组(p<0.001);而DA3-CH组GDNF阳性细胞数明显高于Liraglutide组GDNF阳性细胞数(p<0.001)。3.Western blot结果检测各组小鼠中脑组织中的TH、IBA-1、GFAP、GDNF的表达水平,结果显示如下:3.1.酪氨酸羟化酶TH含量:MPTP模型组、Liraglutide组、DA3-CH组较对照组的TH蛋白含量均减少(p<0.001),MPTP模型组最少,Liraglutide组次之,DA3-CH组含量明显高于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。3.2.IBA-1表达水平:各处理组较对照组IBA-1表达量均明显增长(p<0.001),MPTP模型组最多,Liraglutide组次之,DA3-CH组含量明显少于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。3.3.GFAP表达水平:生理盐水对照组GFAP表达量最低(p<0.001),MPTP模型组GFAP表达量最多,Liraglutide组次之,DA3-CH组含量明显少于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。3.4.GDNF表达水平:与对照组比较,药物处理组的GDNF表达量均降低(p<0.001),MPTP模型组GDNF表达量最少,Liraglutide组次之,DA3-CH组GDNF含量明显高于MPTP模型组及Liraglutide组(p<0.001)。结论:1.新型GLP-1/GIP双受体激动剂DA3-CH可以增加小鼠黑质及纹状体区酪氨酸羟化酶TH含量、减轻黑质区神经炎症反应、促进胶质细胞源性神经营养因子GDNF的表达,改善由MPTP导致的PD小鼠的运动功能障碍,对帕金森病模型小鼠具有神经保护作用;2.GLP-1受体和GIP受体联合激活比单独激动GLP-1受体对于帕金森病模型小鼠具有更显著的神经保护作用。