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利用特异性营养琼脂纤维蛋白平板筛选、分离和纤溶活性测定，直接筛选获得产纤溶酶活性较高的纳豆芽孢杆菌NJ和NS，通过形态观察和生理生化特性分析，两菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌。 利用单因素实验，研究了NJ菌株发酵制备溶栓纳豆的最佳工艺条件，其结果为:精选大豆室温浸泡16h，高压120℃(0.105Mpa)蒸煮50min，种子液培养9h，接种量3％，37℃发酵24h，4℃成熟24h，在此发酵条件下，纳豆纤溶活性达756U/g。 通过生理盐水浸提、硫酸铵分级沉淀和SephadexG-100凝胶层析等纯化步骤，从纳豆中获得纳豆激酶粗酶(CNK)和层析纯纳豆激酶(GNK)，SDS-PAGE电泳显示GNK为两条带;粗酶纤溶活性研究结果表明，纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0，pH6-10溶液中40℃以下基本稳定，pH＜5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件作用下，粗酶完全失去纤溶活性，而纳豆的生理盐水浸提液的纤溶活性保留25％;SDS-PAGE电泳显示，粗酶经胰蛋白酶作用2h后，纳豆激酶没有被降解，结果表明纳豆激酶适合制成肠溶胶囊。 通过单因素试验和正交分析方法，研究纳豆激酶水解酪蛋白反应的最适合条件，其结果为:酪蛋白浓度16mg/ml; pH8.0，温度60℃，酶用量2.0ml，在此条件下，纳豆激酶催化酪蛋白水解的酶促反应速度为0.836(μg/mL.min)。表明可用酪蛋白作底物检测纳豆激酶的酶活大小，该方法简便，重现性好。 为了获得有纤溶活性的纳豆芽孢杆菌NK单一组分，通过PCR从NJ菌株获得纳豆激酶全基因，再通过PCR从全基因中克隆了纳豆激酶成熟肽基因(NK)及其酶原基因(ProNK);将纳豆激酶成熟肽基因(NK)分别插入原核表达载体pET28a(+)和pGEX-2T中，构建了重组质粒pET28a(+)-NK和pGEX-2T-NK，转化大肠杆菌EcoliBL21(DE3)进行表达，SDS-PAGE检测分析表明，克隆入表达载体pET28a(+)的NK在大肠杆菌BL21中大量表达，在30kD左右出现一条浓度非常高的蛋白条带，其大小与理论值一致，但表达产物以包涵体形式存在，不具有纤溶活性。将纳豆激酶酶原基因(ProNK)插入到原核表达载体pGEX-2T中，得到重组质粒pET28a(+)-ProNK，然后转化大肠杆菌Ecoli BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。经纤维蛋白平板检测，插入原核表达载体pGEX-2T中的ProNK能在大肠杆菌菌体中表达有纤溶活性的产物。 纳豆激酶粗酶体外溶栓试验显示，纳豆激酶降解纤维蛋白的方式是直接溶解，而不是通过激活纤溶酶原;血凝块溶解试验及血凝试验结果表明，粗酶有显著的溶解血块能力，在一定的剂量范围内，其溶解血凝块的作用与其剂量呈正比关系，且不影响血液的正常凝固;超过这个范围，或者由于血浆对纳豆激酶纤溶活性的中和使其不能表现纤溶效果，或者因为纳豆激酶剂量过高，导致血凝障碍和溶血作用。 首次对纳豆激酶的溶血性进行确定。结果表明纳豆激酶粗酶、层析纯纳豆激酶有溶血作用，而分子克隆表达的纤溶活性纳豆激酶没有溶血作用。表明纳豆激酶粗酶的溶血作用是纳豆杆菌分泌的溶血素引起的，而溶栓活性成分纳豆激酶不具有溶血性，这一研究为纳豆激酶作为溶栓药物的开发提供了重要的理论依据。 首次模拟人长期服用纳豆的摄入方式，给动物灌喂长达二周的纳豆激酶肠溶胶囊。观察给药后动物体内纤溶系统、凝血系统及游离血红蛋白含量变化。结果表明，正常家兔口服纳豆激酶胶囊后，缩短血浆优球蛋白溶解时间，血液游离血红蛋白含量不超过正常值，血浆内、外源血液凝固系统和血浆纤维蛋白原含量未见影响。动物试验的结果与体外溶栓试验的结果基本一致。