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本论文由两部分组成。在第一部分中,我们克隆了斑马鱼zLPTS基因,对其在斑马鱼胚胎发育和成体组织中的表达模式,以及端粒酶活性调控中的作用进行了研究;在第二部分中,我们克隆了斑马鱼LIS1基因,对其在胚胎发育和成体组织中的表达模式,以及在胚胎发育中的作用进行了研究。
LPTS/PinX1基因是由我们实验室最早克隆的一个肿瘤相关的抑制基因。研究发现,LPTS/PinX1蛋白能够与端粒相关蛋白TRF1和TERT相互作用,通过调控端粒酶的活性来调节细胞的生长和增殖。但除人之外,其他物种中关于LPTS/PinX1基因的研究并不多。为了增进对LPTS/PinX1的认识,我们克隆了斑马鱼中的LPTS/PinX1基因(zLPTS)。我们检测了斑马鱼胚胎和成体中zLPTS基因的表达情况,发现它在胚胎发育不同时期和成体不同组织中都有表达。我们研究了斑马鱼zLPTS蛋白在细胞中的定位情况,发现它主要定位于细胞的核仁中,同时有少部分定位于端粒上。为研究zLPTS对斑马鱼端粒酶的调控,我们检测了斑马鱼中端粒的长度和端粒酶的活性,克隆了斑马鱼端粒酶蛋白亚基zTERT,并检查了它与zLPTS蛋白的结合情况。结果表明,zLPTS能够与zTERT蛋白的RNA结合结构域相互结合。我们进一步发现,zLPTS蛋白能够抑制斑马鱼的端粒酶活性。我们的研究表明,斑马鱼zLPTS基因具有与人LPTS/PinX1相似的功能。对斑马鱼zLPTS基因的研究,有助于增加我们对端粒和端粒酶调控的认识及其在胚胎发育过程中的功能。
LIS1基因是最早发现的无脑回症的致病基因。对LIS1基因的研究主要集中于它在细胞分裂和迁移的分子机制的功能上,而对它在胚胎发育中的作用却知之不多。为了研究LIS1在胚胎发育中的作用,我们克隆了斑马鱼LIS1基因,对其在胚胎发育和成体组织中的表达进行了检测,并对它在胚胎发育中的作用进行了初步的研究。我们发现,斑马鱼包含两个LIS1基因,LIS1a和LIS1b,它们在胚胎发育的不同时期和成体不同组织中都有表达,但在脑组织中的表达量最高。抑制LIS1基因的表达会导致胚胎发育出现多种异常,并最终导致死亡。我们的研究表明,斑马鱼LIS1基因在胚胎发育过程中具有重要的作用。对斑马鱼LIS1基因的深入研究,有助于我们对胚胎发育和脑部器官发育分子机制的认识。