杜鹃红山茶种质资源遗传多样性初步研究

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本文在调查原生地杜鹃红山茶(Camellia azalea Wei)的基础上,选取194棵杜鹃红山茶开展形态多样性研究,选取148棵杜鹃红山茶采用SRAP分子标记进行遗传多样性研究(其中有65棵杜鹃红山茶既用于形态研究又用于分子研究,共调查杜鹃红山茶277棵)。本文旨在探明材料间的遗传关系,为杜鹃红山茶种质资源的有效保护、良种选育提供理论和科学实践依据。研究表明:  (1)对194棵杜鹃红山茶材料的树高、主径基径、嫩叶颜色、嫩枝颜色、节间距、叶面形态、叶缘金边、叶端形态、叶宽和叶长多项形态指标进行分析,发现树高的变化范围为0.8~5.8 m,平均值为2.3 m;叶宽变化范围在2.1 cm~4.3cm,平均值为3.1 cm;叶长变化范围在6.4 cm~10.9 cm,平均值为8.7 cm;叶缘金边都很明显;变异最大的是嫩叶的颜色,变异系数达65.0%;其次为嫩枝颜色,变异系数达58.0%;树高、节间距和叶端形态的变异系数都达到40%以上;变异最小的是叶长,变异系数只有9.9%。  (2)对各项指标进行简单相关分析发现呈极显著正相关/负相关的形态指标有8对,呈显著正相关/负相关的指标有2对。依据叶片长宽比和嫩叶、嫩枝的颜色将杜鹃红山茶分为四类。第一类共108个号,嫩叶和嫩枝的颜色是都是红色,叶片长宽比≤3;第二类共38个号,嫩叶和嫩枝的颜色都是红色,叶子长宽比>3;第3类共30个号,嫩枝的颜色是绿色或黄绿色,嫩叶的颜色是红色、绿色或黄绿色,叶片长宽比为2.3~3.7;第四类共18个号,嫩枝的颜色是红色或黄色,嫩叶的颜色是黄色、绿色或黄绿色,叶片长宽比为2.4~3.6。其中第一类和第二类的嫩枝、嫩叶的颜色都是红色,第三类和第四类的主要区别在于嫩枝颜色的不同。  (3)利用天根试剂盒成功提取了148棵杜鹃红山茶基因组DNA,通过核酸蛋白快速检测仪检测杜鹃红山茶DNA的OD值,其260/280为1.7~1.9,260/230为1.7~1.9。表明得到的DNA质量很纯,大分子蛋白和小分子色素基本已除尽。  (4)利用均匀试验建立了杜鹃红山茶SRAP反应体系。对模板DNA、引物含量、酶含量、镁离子含量和dNTP含量5因素4水平进行均匀试验设计,建立了适合杜鹃红山茶SRAP扩增的反应体系:25 uL反应体系中包括1 U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA,0.1 mmol/L dNTPs,0.52 umol/L引物,1.5 mmol/L Mg2+。  (5)利用优化的SRAP-PCR反应体系和从567对引物中筛选出的15对SRAP引物对148份杜鹃红山茶进行了SRAP-PCR扩增,结果得到191条谱带,其中多态性条带148条,平均每条引物扩增出12.73条带,多态性比例为77.04%,并利用NTSYS软件计算了各材料间的遗传距离,遗传距离在0.012到0.228之间,表明杜鹃红山茶遗传多样性较低。按UPGMA法进行聚类分析,在遗传距离为0.142时,将杜鹃红山茶分为三大类群。
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