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目的： 观察nestin在GIST中蛋白和转录水平的表达，分析其在GIST的临床病理诊断以及发生发展中的价值；检测GIST中PDGFRα基因的突变位点及类型，分析PDGFRα突变与C-kit突变的关系，探讨其在GIST发病机制中所起的作用。 方法： 收集发生于消化道、网膜、肠系膜的间质瘤石蜡标本116例(其中22例同时收集新鲜组织)，并收集正常胃肠道组织和胃肠道平滑肌瘤作为对照；采用nestin、C-kit和CD34抗体进行免疫组织化学染色；利用RT-PCR法观察GIST中nestin和C-kit在转录水平的表达；利用Western-Blot法检测GIST组织中nestin和C-kit的表达；运用PCR-SSCP法及DNA测序检测22例GIST标本中C-kit exon11、PDGFRα exon12和exon18的基因突变；所有资料用SPSS统计软件进行分析处理。 结果： 1．免疫组化结果显示116例GIST中nestin蛋白的阳性表达率为89.7％(104／116)，阳性信号位于胞质和胞膜，呈棕黄色颗粒。良性组与恶性组nestin的阳性表达率分别为88.7％、90.5％，两组之间表达水平的差异无显著性意义(x~2=0.1，P＞0.05)。GIST不同年龄(x~2=1.43，P＞0.05)、不同性别(x~2=0.173，P＞0.05)、肿瘤的大小(以最大径为标准)(x~2=1.654，P＞0.05)、不同部位(x~2=0.346，P＞0.05)以及不同组织学分型(x~2=0.577，P＞0.05)之间nestin表达水平的差第二军医大学硕士论文中丈摘要异均无显著性意义。116例GIST中C一kit蛋白的阳性表达率为94.8%( 110/116)，CD34的阳性表达率为75%(87/116)，阳性信号为胞质和胞膜型.6例C-kit阴性的GIST中均有nestin表达.N比tin和CD抖表达水平之间的差异有显著性意义(xZ二4.45，尸<0.05)，nestin和C.kit表达水平之间的差异无显著性意义(x2=1.084，尸>0.05)。平滑肌瘤中0拓t和n。范n均呈阴性表远正常胃肠道组织C.kit阳性的卡哈尔细胞中，n图tin表达亦为阳性.RT孑〔R结果显示22例GlsT中均有n。石n和C.kit在转录水平的表达，两者的大小分别为337bp、225bp.良性、恶性GlsT组之间nestin和Gkit表达水平的差异均无显著性意义.在正常胃肠道组织中亦有朋stixl和C.kit的一定表达，其表达量比GIST中的表达量低，正常组织与肿瘤组织之间表达量的差异有显著性意义.平滑肌瘤中ne拓n、C.kit呈阴性表达.叭触以。刀一lot结果显示22例GIST中n。范n和C‘kit均呈阳性表达，分别表现为在220KD、145KD附近有明显的条带.Nestin和C一t在平滑刀嘴中均呈阴性表达.正常胃肠道组织中有nestin和C.kit的表达，但强度较弱.PDGFRa及C一kit的突变检测:22例GIST和作为对照的平滑肌瘤、神经鞘瘤、正常胃肠道组织的DNA用C.kit exonll、PDGFR a exonlZ和exonls的引物进行PCR扩增，其PCR产物在1 .5%琼脂糖凝胶电泳中分别显示长度为225bP、260饰、25obp的条带.PCR，SscP检测结果显示22例GlsT中，c一、PDG限a exonIS和PDGERa exon12的突变率分别为31.8%(7/22)、22.7%(5/22)、4.5%(l/22).平滑肌瘤、神经鞘瘤和正常胃肠道组织中未检测出C七t和POGFRa的突变.6例PDGFRa突变阳性的GIST标本送检测序，结果显示PDG限aexon18的突变类型有:点突变:密码子2834处T，C，密码子2866处C一T，密码子2910处T一C，密码子2954处A一G;插入突变:密码子2891和2892之间插入一个碱基G.1例经l℃R一SSCP检闭lJ为PDGFR a exon12突变阳性的GIST测序结果正常.在本实验组的22例GIST标本中C.kit的突变与肿瘤的良恶性(xZ=0.187，尸第二军医大学硕士论文中文摘要>0.05)、部位(xZ一0.573，尸>0.05)、大小(xZ一0.05，P>0.05)、患者的年龄(xZ=0.646，P>0.05)、性别(xZ=1.18，P>0.05)和组织学分型(xZ二1.455，尸>0.05)等因素均无关;同c一kit一样，PDGFRa的突变与肿瘤的良恶性(xZ一0.856，尸>0.05)、部位(xZ=0.173，尸>0.05)、大小(xZ一0.2，尸>o一05)、患者的年龄(xZ=0.002，尸>0.05)、性别(xZ二3.115，p>0.05)和组织学分型(xZ=0.2，尸>0.05)等因素均不相关。结论:1 .GIST中存在讹拓n的高表达，具有敏感性高、特异性强的特点，为GIST的诊断 提供了一项重要指标，与C一kit联合使用有助于提高GIST的诊断.2.正常胃肠道组织中的卡合尔细胞可同时表达C一kit、nestin，支持GIST可育公链源 于向卡哈尔细月色表型分化的原始干细胞的学说。3.Nestin和C一kit在良性与恶性GIST间的表达水平无差异，都不能提示该肿瘤的良、 恶性程度，与患者的年龄、性别、肿瘤大小、部位及组织学分型等因素亦无关。4.GIST中存在PDGFRa的突变，并且多发生在C一t突变阴性的GIST中，提示 PDGI;Ra突变与C一kit突变对GisT的发生发展可能均发挥着重要作用.5.PDGFRa的突变可发生在良性与恶性GIST中，提示PDGFRa的突变与C一kit 突变一样可发生在GIST的早期阶段。具有PDGFRa突变而形态学为良性的 GIST可能存在一定恶性潜能，对此尚需进行更多的观察研究。