【摘 要】
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目的:体外构建HSV-1UL43真核表达载体,利用生物信息学分析结果,在体外对其表达的蛋白质的功能进行初步研究,为探究UL43编码蛋白质与药物作用的靶点打下基础。方法:1.利用生物信息
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目的:体外构建HSV-1UL43真核表达载体,利用生物信息学分析结果,在体外对其表达的蛋白质的功能进行初步研究,为探究UL43编码蛋白质与药物作用的靶点打下基础。方法:1.利用生物信息学DNAStar软件,Protpara软件soPMA程序ESyPred3D程序http://bp.nuap.nagoya-u.ac.jp/sosui/;http://mendel.imp.ac.at/sat/DAS/DAS.html等网站或程序对HSV-1UL43遗传进化树和UL43p结构和功能进行预测和分析。2.利用基因工程原理方法,构建HSV-1UL43用于体外表达的T克隆载体和真核表达载体。3.构建HSV-1膜融合过程中必要的四种基本糖蛋白(gB,gD,gH-gL)T克隆载体以及真核表达载体。利用脂质体转染效应细胞,细胞免疫酶联分析,体外分析UL43p在细胞到细胞膜融合过程中的作用。结果:1. HSV-1UL43基因存在于α和γ类疱疹病毒中,并与猴类同源性较高,与同为人类疱疹病毒的HHV-3及HHV-8同源性较低。但结构显示Prv UL43同源性与HSV-1较高。2. HSV-1UL43p中磷酸化位点较为丰富。UL43p跨膜结构综合预测为8跨膜,与PrvUL43p相类似。3.体外构建的克隆载体和真核表达载体经测序后,其序列与实际情况相符。HSV-1UL43p分子量为34kDa。4.细胞免疫酶联反应显示UL43p有抑制膜融合的作用,其效果呈剂量依赖性。结论:作为单纯疱疹病毒编码的跨膜蛋白,HSV-1UL43p与HSV-1UL20p等非糖蛋白类似,在细胞到细胞膜融合过程中发挥着“刹车员”的作用:具有抑制膜融合的效果。
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