静电纺功能化纳米纤维支架用于小口径血管组织再生的研究

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调查研究显示,由心脏冠状动脉粥样硬化造成的心肌梗死引发的死亡概率在不断上升。冠状动脉硬化性心脏病、血管瘤、周围血管缺损等疾病造成的心脏停跳致死的比例极高。心血管疾病的高发病率使得冠动脉搭桥等移植血管的手术方法最有效的治疗动脉堵塞,由于广泛的外周血管疾病和/或以前的旁路手术中的使用,自体组织的使用受到有限的可用性和适用性的阻碍。当用作小直径替代物时,今天的临床使用的人造血管移植物材料与高闭塞/失败率相关。因此,开发针对制造小直径血管移植物的创新技术势在必行。静电纺丝技术是一种常用的组织工程支架材料的制备方法。静电纺丝技术制备的支架具有比表面积大、孔隙率高、纳米纤维直径可与体内众多细胞相媲美等优点。此外,纳米纤维可以负载生长因子诱导细胞粘附、增殖和分化。因此,电纺丝技术制备纳米纤维小口径血管支架在细胞培养和细胞外基质结构模拟方面具有显著的优势,展现了重要的应用前景。
  本课题通过选择原材料,改进支架制备的方法与选择合适的药物促进细胞的增殖与分化等方面采用静电纺丝技术制备功能性人工小口径血管支架。有研究表明,丹参来源于丹参,是一种中药,可促进内皮细胞的增殖和迁移。本实验采用同轴静电纺丝法制备人工血管移植物内层,负载抗凝肝素和 SAB。肝素和 SAB的释放持续了将近30天,并且没有SAB的初始爆发释放。此外,SAB和肝素的联合作用有助于促进人脐静脉内皮细胞的生长,并提高移植物的血液相容性。此外,通过SAB上调GRP78保护人内皮细胞免受氧化应激诱导的细胞损伤。在皮下植入SD大鼠两周后,用马松三色法和H&E染色法进行体内评价,表明移植物具有良好的生物相容性,并没有引起明显的免疫应答。因此,功能层内有预防急性血栓形成和促进人工血管快速内皮化。
  在此基础上,本实验研究制备了两层血管复合移植材料。将聚乙二醇和肝素接枝在介孔二氧化硅纳米粒子上对 PLGA/胶原纳米纤维制备的内层进行修饰,促进细胞增殖,改善血液相容性。外层由聚氨酯纳米纤维组成,以提供机械支撑。人脐静脉内皮细胞在内层生长增殖明显,血液相容性试验表明内层具有良好的血液相容性。在内层降解过程中,在体外观察到纤维表面上的MSN-PEG-Hep粒子。体外降解实验60天后,纤维膜的重量损失了92.4%。在体内降解过程中,内层没有引起炎症反应,在PC/MSN-PEG-Hep纤维膜上有均匀的细胞生长进入材料。通过H&E和免疫组织化学染色,对植入兔颈动脉的复合移植物进行为期8周的评价,表明复合移植物上再生了单层内皮(CD31标记)和平滑肌(αSMA标记)。我们的研究结果表明,此种具有功能化内层的复合血管移植物有潜力可用于小口径血管的长期通畅率。
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