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目的：宫颈癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤。随着宫颈癌筛查技术的普及和治疗手段的不断进步，早期宫颈癌的诊断和治疗水平均得到很大提升，但中晚期患者治愈率仍徘徊于较低的水平。治疗失败的主要原因应归结于肿瘤的复发和转移，也是临床上迫切需要解决的棘手问题。肿瘤干细胞理论的提出为研究者展开了新的视角，人们逐渐意识到只有一小部分具有干细胞特性、能够自我更新分化的癌细胞才是肿瘤侵袭转移、放化疗抵抗以及复发的根源。目前已在多种实体肿瘤中成功分离出肿瘤干细胞，并对维持肿瘤干细胞自我更新分化的一些调控因子展开了大量研究。其中干细胞转录因子SOX2(Sex-determining region of Y chromosome(SRY)-related high-mobility-group box2）广泛分布在各种肿瘤及肿瘤干细胞中，扮演着原癌基因的角色，维持肿瘤细胞的干性并促进其侵袭转移。宫颈癌的组织学类型以鳞状细胞癌为主，SOX2定位于染色体3q26.33，正是肺、鼻咽及口腔等鳞状细胞起源的恶性肿瘤常见的基因频繁扩增区域。2010年，Ji等首次报道SOX2蛋白在在宫颈上皮内瘤变Ⅲ级及宫颈鳞癌组织中的表达升高，并且与肿瘤分化程度相关。目前SOX2在宫颈癌中的研究并不多见，大部分研究结果表明宫颈癌中确实出现SOX2表达异常的现象,且可能与宫颈癌细胞的干性相关。然而对SOX2在宫颈癌中的具体作用机制以及在宫颈癌侵袭转移过程中发挥的作用尚不十分清楚，其上下游的靶基因及相关信号通路的研究尚属起步阶段。本课题研究的目的在于探索SOX2在宫颈癌侵袭转移中的作用机制及相关信号通路，为开发新的、靶向的宫颈癌治疗手段提供理论基础。 方法：⑴Western Blot法检测SOX2蛋白在正常宫颈组织、癌前病变组织及宫颈鳞癌组织中的表达差异。⑵应用免疫组织化学方法定性检测83例宫颈鳞状细胞癌组织中SOX2蛋白的表达情况。分析其与患者年龄、FIGO分期、组织病理学分级、淋巴结转移及肿瘤大学等临床病理参数的关系;分析SOX2与血清鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)的表达水平及患者预后的相关性。⑶构建SOX2过表达及shRNA干扰质粒，使用脂质体法转染宫颈鳞癌SiHa细胞，以内源性过表达和沉默SOX2，并用Western Blot和qRT-PCR法对转染效果进行验证。⑷收集转染后的各组细胞，观察SOX2表达改变后对SiHa细胞生物学行为的影响。MTT比色法检测在SOX2不同表达水平的影响下SiHa细胞活性的差异，平板克隆实验观察克隆形成能力的改变，划痕愈合实验及Transwell小室法分别检测细胞的体外迁移和侵袭能力。⑸Western Blot法检测SOX2过表达及沉默后对Akt、p-Akt，ERK1/2，p-ERK1/2蛋白表达的影响。⑹将LY294002和U0126分别加入SOX2过表达及其阴性对照组细胞中，以阻滞PI3K/Akt和ERK1/2信号通路的传导，并用Western Blot法验证阻断效果，之后进行Transwell实验，以观察通路阻断后对SOX2促进的细胞侵袭转移现象的影响。⑺Western Blot法检测SOX2沉默后E-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白的表达，分析SOX2表达改变在上皮间质转化过程中发挥的作用。 结果：①Western Blot结果显示在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织及宫颈鳞状细胞癌组织中SOX2的相对表达量的分别为0.07±0.12、0.48±0.30，0.67±0.27。与正常宫颈组织组及上皮内瘤变组相比较，宫颈鳞状细胞癌组中SOX2蛋白表达升高，差异具有统计学意义(P＜0.001)。②免疫组化结果显示SOX2主要定位于宫颈鳞状细胞癌的细胞核中，83例宫颈癌组织中有29例SOX2蛋白高表达，占全部病例的34.9％。SOX2表达水平与患者年龄、肿瘤大小、FIGO分期、淋巴结转移等情况均无明显相关性，但是与肿瘤细胞的分化程度呈明显相关(P＜0.001)。SOX2的高表达与患者血清中SCC-Ag水平的升高呈正相关，且与较低的5年生存率相关(P＜0.001)。③脂质体法转染SOX2过表达及shRNA干扰质粒，Western Blot和qRT-PCR结果表明SiHa细胞中SOX2基因及蛋白的表达水平得到有效改变。④在转染后的各组细胞中进行MTT检测。结果表明SOX2表达的改变与SiHa的活细胞数量无显著相关性（P＞0.05）。⑤将SOX2过表达的稳转SiHa细胞系及其对照组细胞接种于培养皿中进行克隆形成实验，我们发现SOX2过表达组细胞克隆形成数显著高于未经处理组及转染空载质粒组(P＜0.01)，而对照组之间无明显差异，SOX2表达的上调可能促进SiHa细胞的克隆生成能力。⑥Transwell小室及划痕实验结果显示，转染SOX2过表达质粒使SOX2高表达后，与空白及空载对照组相比，SiHa细胞穿膜细胞数及迁移率均明显升高(P＜0.05)，而转染SOX2 shRNA沉默其表达，则结果相反。⑦Western Blot结果显示SOX2过表达及沉默后信号通路相关蛋白Akt、ERK1/2蛋白表达水平基本未受影响，而p-ERK、p-AKT蛋白水平在SOX2高表达组细胞中明显升高、而在沉默组细胞中则明显下降（P＜0.05）。⑧将LY294002和U0126分别加入SOX2过表达及其阴性对照组细胞中，Western Blot结果显示p-ERK、p-AKT蛋白水平明显下降表明PI3K/Akt、ERK1/2信号通路阻断成功。之后进行Transwell实验，结果显示信号通路阻断后，与加入对照试剂DMSO相比，各组细胞的穿膜数明显下降，组间差异具有统计学意义(P＜0.001)。⑨Western Blot实验表明，在SiHa细胞中沉默SOX2后，上皮间质转化相关标志物E-cadherin明显上升，而Vimentin、MMP2、MMP9则显著下降(P＜0.05)。 结论：⑴SOX2在正常宫颈组织，CIN及宫颈鳞状细胞癌组织中的表达逐级升高，提示SOX2的表达增高可能是宫颈癌发生发展的机制之一。SOX2的高表达与宫颈鳞状细胞癌的分化程度、SCC-Ag水平及不良预后相关。⑵上调宫颈鳞癌SiHa细胞中SOX2的表达，可以促进细胞的增殖、迁移、侵袭能力;抑制SOX2表达则起到相反的作用。⑶SOX2过表达可以激活Akt、ERK1/2信号通路。阻断这两条信号通路可以抑制由SOX2过表达诱导的细胞侵袭行为。SOX2可能通过Akt、ERK1/2通路发挥作用。⑷沉默SOX2表达可以改变EMT相关标志物的表达水平，SOX2可能参与了宫颈鳞癌的上皮间质转化过程。