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目的:1.研究以Behcet病、VKH综合征为代表的自身免疫性葡萄膜炎患者外周血中Th17细胞、Treg细胞及相关细胞因子的表达,及其在疾病的活动期、静止期的表达特征;2.研究实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠模型中Th17细胞、Treg细胞及相关细胞因子在不同病程中的动态表达,并分析Th17/Treg表达失衡与EAU发病的关系。方法:1.收集活动期和静止期的Behcet病、VKH综合征患者及健康人外周静脉血4ml,采用流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的比例变化;ELISA检测血清中IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β细胞因子的浓度变化;2.在6-8周龄Lewis大鼠两足底、腹壁两侧和脊背中央5点皮下注射用光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP1177-1191)、完全弗氏佐剂(CFA)和结合菌素(TB)充分混匀的乳糜液共300ul构建EAU大鼠模型。免疫后每天用Genesis-D眼部照相机观察大鼠眼部炎症变化,并进行临床评分;分别于免疫后9、13、18、23天摘取大鼠眼球做HE病理染色,比较大鼠眼组织病理学差异;分别于免疫后9、13、18、23、28、35、48天处死大鼠,摘取淋巴结、脾脏,提取单细胞悬液,并用Ficoll密度梯度离心法分离纯化T淋巴细胞,通过流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的比例变化;ELISA检测免疫后各时间点大鼠血清中IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β细胞因子的浓度变化;实时荧光定量PCR技术检测免疫后各时间点淋巴结、脾脏中IL-17、IL-6、TGF-β和Foxp3 m RNA的表达。结果:1.静止期,Behcet病和VKH综合征患者外周血中Th17细胞、Treg细胞比例与健康对照组无统计学差异;活动期,Behcet病和VKH综合征患者外周血中Th17细胞比例明显升高,与其静止期和健康对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05),而活动期,患者外周血中Treg细胞比例呈下降趋势,与其静止期和健康对照组比较差异均具有统计学意义。血清ELISA检测发现,IL-17、IL-6和TGF-β的变化与Th17细胞的比例变化趋势基本一致,而IL-10的变化与Treg细胞比例的变化趋势一致;2.EAU大鼠在免疫后第7-8天开始出现眼部炎症表现,第13天达到高峰,然后逐渐缓解至21天眼部炎症基本消失;组织病理学检查结果与眼底照相机观察结果相符;流式细胞术检测发现EAU大鼠淋巴结、脾脏中Th17细胞比例均在第9天升高(P<0.01与正常大鼠比较),13天达到高峰,然后逐渐下降,23天与正常大鼠比较有统计学差异(P<0.05),至28天下降到正常水平,与正常大鼠比较无统计学差异;EAU大鼠淋巴结中Treg细胞比例在第13天明显升高(P<0.01),脾脏中Treg细胞比例在第9天即明显升高(P<0.01),然后两者均在18天达到峰值,直至第48天仍维持在较高水平,与正常大鼠比较仍具有统计学意义(P<0.01)。淋巴结中Treg/Th17细胞的比值在第18天明显升高(P<0.05),脾脏中Treg/Th17细胞的比值在第23天明显升高(P<0.01),两者均在28天达到峰值,直至48天依然维持在较高水平(P<0.01);血清ELISA检测发现,IL-17和IL-6的变化与Th17细胞的比例变化趋势及EAU大鼠眼部炎症变化趋势基本一致,而IL-10和TGF-β的变化与Treg细胞比例的变化趋势一致;实时荧光定量PCR的结果验证了Th17细胞和Treg细胞基因水平的表达。结论:1.葡萄膜炎患者活动期Th17细胞比例及相关细胞因子的水平均升高,而Treg细胞比例及相关细胞因子的水平下降,说明在葡萄膜炎患者发病期存在Th17/Treg细胞的不平衡表达;2.EAU模型中Th17细胞比例及相关细胞因子的水平均在疾病的初发期开始升高,效应期达到峰值,恢复期逐渐恢复到正常水平,与EAU大鼠眼部炎症变化趋势一致。而Treg细胞及相关细胞因子和转录因子的水平均在缓解期达到高峰,直至恢复期仍维持在较高水平。所以在EAU大鼠的病程中存在Th17/Treg细胞的平衡,而这种平衡可能在EAU大鼠自愈现象中发挥重要作用。