【摘 要】
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本文利用单光镊系统研究了人胚胎肾细胞293A活细胞膜上α1B肾上腺素受体在激动剂刺激后发生内陷的启动阶段力学特点。 首先研究并总结了聚苯乙烯微球表面抗体修饰和检验的
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本文利用单光镊系统研究了人胚胎肾细胞293A活细胞膜上α1B肾上腺素受体在激动剂刺激后发生内陷的启动阶段力学特点。
首先研究并总结了聚苯乙烯微球表面抗体修饰和检验的方法。采用生物素一亲和素反应体系可以将抗体包被在聚苯乙烯微球表面；包被后的检验方法可分为定性和定量两种方法：前者包括细胞培养对照法和荧光抗体标记法，后者是流式细胞仪定量检测法。
其次，改变传统的光镊观察活细胞的细胞放置方法，即将盖玻片水平放在光学显微镜载物台上，而是制作盖玻片细胞槽，将有贴壁细胞HEK293A等的盖玻片竖立在光镊载物台上，建立了利于光镊操作贴壁细胞的有效方法。
最后，通过上述实验方法和实验体系的建立，测量了在PE刺激后α1B-肾上腺素受体内陷力的变化，包括黏附频率的差异、有无激动剂存在的情况下α1B-肾上腺素受体内陷力的比较、PE刺激后α1B-肾上腺素受体内陷力大小与时间的变化关系以及α1B-肾上腺素受体单分子内陷力的初步测量。结果显示在本课题所应用的光镊平台条件下，加入激动剂PE刺激时测得的α1B-肾上腺素受体内陷力在30分钟内随时间明显变化，逐渐减小，从18.03pN减小到8.05pN；根据对PE刺激时α1B-肾上腺素受体内陷力的分布频率分析，发现一组内陷力数值呈明显线性倍增关系，即2.54pN、4.72pN、10.69pN、22.47pN和28.90pN。出现这种线性倍增关系的原因可能是当只有一个受体内陷力被测量到时，则测得的力为最小值，当两个或更多个受体内陷力被同时测得，测得力的大小随受体数目增加而呈线性倍增。结果表明，在我们使用的光镊系统下，测得的α1B肾上腺素受体单个分子内陷力约为2.54±0.63pN。
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