絮凝活性微生物的筛选、鉴定及活性部位的研究

来源 :辽宁医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunrain0428
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本文通过稀释平板法从酸浆中筛选分离到27株絮凝活性菌,经过复筛得到8株高效稳定的絮凝活性菌株。对筛选得到的菌株进行了菌种鉴定,根据其个体形态特征、生理生化试验结果及16S rDNA序列分析,参照《伯杰细菌鉴定手册》,鉴定菌株为副干酪乳杆菌。在单因素实验和Plackett-Burman实验设计的基础上,从基础培养基的8个因素中筛选出具有显著意义的4个因素:葡萄糖、醋酸钠、MgSO4·7H2O、酵母粉。然后用响应面设计对这4个因素进行优化分析,获得了这几个因素的最佳添加量:葡萄糖20g、醋酸钠5.85g、硫酸镁0.378g、酵母粉9.15g。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合试验设计,以初始pH、接种量、培养温度和培养时间4个因素为响应因子,絮凝率为响应值分析各因子与絮凝率之间的影响关系。最终建立二次回归方程为Y1=-103.602+5.166X1+5.848X2+8.312X3+0.0580X4-1.028X12-0.14X1X2+0.263X1X3+0.0185X1X4-0.141X22-0.097X2X3-0.003X2X4-0.166X32-0.002X3X4-0.0006X42,并得到相关系数R2=0.9550,对各因子的显著性及交互作用分析后,确定了最佳培养条件为:初始pH6.0、接种量8%、培养温度27℃、培养时间48h。在此培养条件下絮凝率的理论值为48.72%,重复验证值为48.65%。本文通过对菌株的发酵培养液、菌体沉淀悬浮液以及菌体胞外多聚物进行絮凝活性测定,确定菌体的絮凝活性部位是菌体本身。并进一步提取菌体的表层蛋白、细胞壁、原生质体测定各自絮凝率,最终确定菌株的絮凝活性部位是菌体的表层蛋白。
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