黄花苜蓿MfDREB1和MfDREB1s基因转化烟草的研究

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本研究将黄花苜蓿MfDREB1和MfDREB1s基因转入模式植物烟草中,获得了T1代转基因植株,并对其抗寒性进行了初步鉴定。  以植物双元表达载体pPZP221为基本骨架,利用组成型启动子CaMV35S和胁迫诱导型启动子rd29A基因启动子,分别构建了MfDREB1和MfDREB1s基因的两种植物表达载体,并通过农杆菌介导法转化烟草。对获得的T0代庆大霉素抗性植株进行PCR检测,初步证明外源基因已整合到烟草基因组中。经T0代转基因植株自交,获得了T1代转基因烟草种子。用40mg/L的庆大霉素筛选T1代,对生长正常的植株进行寒冷胁迫处理,分析了转基因植物中目的基因下游靶基因NtERD10A的表达情况。  主要研究结果如下:1)共获得78株转MfDREB1和MfDREB1s基因的T1代株系,其中35S∶MfDREB123株、35S∶MfDREB1s22株、rd29A∶MfDREB114株、rd29A∶MfDREB1s19株;2)获得38株转空质粒的对照株系,其中35S∶NOS16株、rd29A∶NOS22株;3)对下游基因NtERD10A的半定量分析结果表明,在寒冷胁迫下35S∶MfDREB1和35S∶MfDREB1s转基因烟草中抗逆相关基因NtERD10A的表达量显著高于转空质粒的对照植株35S∶NOS;冷害胁迫后的复苏培养过程中发现,转基因植物的抗冻能力强于对照株系。表明在寒冷胁迫下黄花苜蓿MfDREB1和MfDREB1s基因能增强抗寒相关基因的表达,参与烟草抗寒胁迫应答反应,提高植物的抗寒能力。
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