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帕金森病（Parkinson,s disease,PD）是一种常见的神经系统退行性疾病。目前,PD的病因未明,还没有有效的治疗药物,在临床上,复方左旋多巴（Levdopa,L-DOPA）制剂仍是临床上控制症状的主要药物,但是在服用数年后多会出现疗效降低,症状波动,运动障碍等副作用。所以,研究开发出有效的治疗PD的药物成为当前最重要的任务之一。中医药防治PD具有突出的优势,其中醒脑开窍中药对防治PD的发生发展具有十分重要的作用。石菖蒲是醒脑开窍中药的代表药物,在治疗神经系统疾病方面具有突出的优势。它能够通关开窍、起闭回苏、改善神经功能、减轻脑水肿和神经的损害,对中枢神经系统和脑细胞的超微结构等有确切的保护作用。石菖蒲挥发油是石菖蒲的主要药效部位,而β-细辛醚则是石菖蒲挥发油的主要成分。在我们前期观察中发现:β-细辛醚能够改善6-羟基多巴（6-hydroxydopa,6-OHDA）诱导的PD模型大鼠的行为学;升高纹状体内多巴胺（Dopamine,DA）等神经递质的含量;降低毒性蛋白α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）的含量;并增加脑内的促进DA合成的酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）的表达。所以,β-细辛醚对6-OHDA诱导的PD模型大鼠有治疗作用。目前,美多巴是临床上治疗PD的一线药物,是否β-细辛醚联合小剂量美多巴能够改善6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学、增加脑内DA等神经递质及促进DA合成的相关酶的含量?这样可以减少美多巴的使用剂量,从而延长美多巴的应用时间,同时达到减轻肝肾功能损害的目的。另外,内质网应激和自噬都与PD密切相关,β-细辛醚是否通过内质网应激-自噬机制对多巴胺能神经元起到保护作用值得我们研究。本研究主要由五个实验组成,实验一:观察β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学,DA等神经递质,促进DA合成的相关酶及肝肾功能及组织病理学的作用。探讨β-细辛醚联合应用小剂量美多巴疗效能否达到单独使用全量美多巴的水平,从而达到减少美多巴的使用剂量,延长美多巴的应用时间及减轻肝肾损害的目的。实验二:观察 α-syn mRNA、β-突触核蛋白（β-synuclein,β-syn）mRNA、内质网应激蛋白GRP78 mRNA和自噬蛋白Beclin-1 mRNA在6-OHDA诱导的PD模型大鼠的中脑、纹状体和下丘脑内的动态变化,及α-syn在6-OHDA诱导的PD模型大鼠的中脑和纹状体内的动态变化。同时进行α-syn mRNA和β-syn mRNA,α-syn mRNA和 GRP78 mRNA,α-syn mRNA 和 Beclin-1 mRNA,GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA,α-syn mRNA和α-syn的相关性分析。实验三:观察β-细辛醚对内质网应激及其IRE1/XβP1通路的影响。实验四:在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中观察内质网应激与自噬的关系。实验五:观察β-细辛醚对6-OHDA诱导的PD模型大鼠PERK/CHOP/Bcl-2/Beclin-1内质网应激-自噬通路的影响。实验一 β-细辛醚联合美多巴的药效学研究目的:我们前期研究发现β-细辛醚能够改善6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学;增加纹状体内的DA、高香草酸（Homovanillic acid,HVA）和5-羟基吲哚乙酸（5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA）的含量;降低 α-syn 的含量,并促进脑内TH的表达;此外,β-细辛醚能够促进L-DOPA进入脑内,增加脑内DA的含量。本课题研究β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学,DA等神经递质,促进DA合成的相关酶及肝肾功能和组织病理学的影响,探讨联合应用小剂量美多巴后,能否减少美多巴的使用剂量,疗效与单独使用全量美多巴相当,起到延长美多巴的应用时间的作用,同时能够减轻肝肾功能的损害。方法:本实验应用成年健康SPF级SD大鼠70只,雌雄各半,220-250 g。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,在左侧前脑内侧束内,单点注射6 μl（浓度为 4 μ g/μ l）的 6-OHDA,坐标为 tooth bar:-2.3 mm,antero-Posterior:-4.4 mm,medio-lateral:1.2 mm,dorso-ventral:-7.8 mm。假手术组的 10 只大鼠注射 6 μl的0.02%维生素C生理盐水。造模一个月后,将造模大鼠腹腔内注射0.5 mg/kg体质量的阿扑吗啡（Apomorphine,APO）,大鼠会在水平地面转圈,向健侧旋转圈数大于7圈/min的大鼠为成功PD模型。将造模成功的大鼠随机分为6组,每组10只。分别为模型组（1 ml/100 g 蒸馏水）、美多巴组（75 mg/kg美多巴）、β-细辛醚组（15 mg/kgβ-细辛醚）、β-细辛醚+1/4美多巴组（15 mg/kg β-细辛醚+18.75 mg/kg美多巴）、β-细辛醚+1/2美多巴组（15 mg/kgβ-细辛醚+37.5 mg/kg美多巴）和β-细辛醚+美多巴组（15 mg/kgβ-细辛醚+75 mg/kg美多巴）。每天分2次灌胃给药,给药30天。在给药第28天进行自主运动功能、平衡能力与协调性及感觉运动整合功能的适应性训练,在给药第29和30天进行正式的行为学检测。第31天在1 0%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,腹主动脉取血、腹腔取肝肾、脑内取纹状体和中脑。高效液相（High performance liquid chromatography,HPLC）测定纹状体内 L-DOPA、DA、5-羟色胺（5-Hydroxytryptamine,5-HT）、5-HIAA、3,4-二羟基苯乙酸（3,4-Dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC）和 HVA 的含量;HPLC 测定血清内 DA 的含量;酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清和中脑内多巴脱羧酶（DOPA decarboxylase,DDC）的含量;流式细胞术测定中脑内TH的表达率;ELISA测定肝肾功能指标;苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin staining,HE）染色观察肝肾组织病理学。结果:1.β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠行为学的影响与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的移动格数、站立次数和转棒停留时间均显著性减少（P<0.05）;而中央格停留时间和右前肢启动时间显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,美多巴组、β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的移动格数显著性增加（P<0.05）;美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的站立次数显著性增加（P<0.05）;美多巴组、β-细辛醚组、β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的转棒停留时间显著性增加,而中央格停留时间和右前肢启动时间显著性减少（P<0.05）。与美多巴组大鼠比较,β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的移动格数无显著性差异（P>O.05）;β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的站立次数、转棒停留时间和右前肢启动时间无显著性差异（P>0.05）;β-细辛醚+美多巴组大鼠的中央格停留时间无显著性差异（P>0.05）。2.β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠肝肾功能的影响与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（Aspartate aminotransferase,AST）、肌酐（Creatinine,CR）、血尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）和总胆红素（Total bilirubin,TBIL）的含量无显著性差异（P>0.05）。与模型组大鼠比较,美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的ALT和BUN的含量显著性增加（P<0.05）;美多巴组、β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的CR的含量显著性增加（P<0.05）。3.β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠肝肾组织病理变化的影响假手术组、模型组和β-细辛醚组大鼠的肝组织结构正常,肝细胞排列整齐,边界清晰,形态完整,未见脂肪空泡,汇管区未见炎细胞浸润。肾皮质和髓质结构清晰。肾小球未见增生或萎缩、毛细血管袢未见坏死,肾小球毛细血管未见扩张充血、管壁未见增厚。肾间质未见炎细胞浸润。美多巴组大鼠的肝组织汇管区较多炎细胞浸润。肾间质可见小片状炎细胞浸润。联合用药组大鼠的肝组织结构正常,肝细胞排列整齐,边界清晰,形态完整,未见脂肪空泡,汇管区可见不同程度炎细胞浸润,又以β-细辛醚+1/4美多巴组大鼠的汇管区炎细胞最少。β-细辛醚+美多巴组大鼠的肾间质内小片状炎细胞浸润;β-细辛醚+1/2美多巴组大鼠的肾间质内炎细胞逐渐减少;β-细辛醚+1/4美多巴组大鼠的肾间质内炎细胞最少。4.β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠纹状体内神经递质的影响与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的DA、DOPAC和5-HT的含量显著性减少（P<0.05）。与模型组大鼠比较,美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的L-DOPA的含量显著性增加（P<0.05）;美多巴组、β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的DA和DOPAC的含量显著性增加（P<0.05）;β-细辛醚+1/4美多巴组和β-细辛醚+1/2美多巴组大鼠的5-HT的含量显著性增加（P<0.05）。与美多巴组大鼠比较,β-细辛醚+1/2美多巴组大鼠的L-DOPA的含量无显著性差异（P>0.05）;β-细辛醚、β-细辛醚+1/4美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的DA的含量无显著性差异（P>0.05）;β-细辛醚+1/2美多巴组大鼠的DA的含量显著性增高（P<0.05）;β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的DOPAC的含量无显著性差异（P>0.05）;β-细辛醚、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的5-HT的含量无显著性差异（P>0.05）;β-细辛醚+1/4美多巴组大鼠的5-HT的含量显著性增高（P<0.05）;β-细辛醚、β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的5-HIAA和HVA的含量无显著性差异（P>0.05）。5.β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠血清中神经递质的影响与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的血清中DA的含量无显著性差异（P>0.05）。与模型组大鼠比较,美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的血清中DA的含量显著性增高（P<0.05）。与美多巴组大鼠比较,β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的血清中DA的含量无显著性差异（P>0.05）。6.β-细辛醚联合美多巴对6-OHDA诱导的PD模型大鼠相关酶的影响与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的TH的表达率显著性下降（P<0.05）。与模型组大鼠比较,美多巴组和β-细辛醚+1/2美多巴组大鼠的TH的表达率显著性增高（P<0.05）。在中脑内,DDC的含量在各个组内无显著性变化（P>0.05）。在血清中,与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的DDC的含量无显著性变化（P>0.05）。与模型组大鼠比较,美多巴组、β-细辛醚、β-细辛醚+1/4美多巴组、β-细辛醚+1/2美多巴组和β-细辛醚+美多巴组大鼠的DDC含量显著性下降（P<0.05）。结论:1.联合用药能够改善6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学,β-细辛醚+1/2美多巴组与美多巴组的疗效无显著性差异。2.联合用药能够减轻美多巴对肝肾功能的损害。3.联合用药能够增加纹状体内L-DOPA、DA、DOPAC和5-HT的含量,HVA变化不大;增加血清内DA的含量。4.联合用药对中脑内TH的表达率影响不大。5.联合用药能够抑制血清中的DDC,对中脑内DDC的含量影响不大。实验二 α-syn mRNA、β-syn mRNA、GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA 的动态变化及其相关性目的:前期研究发现,α-syn是路易小体的主要成分,而路易小体是引起多巴胺能神经元死亡的主要原因之一,所以,α-syn是PD的病理基础。还有研究表明,β-syn能够减少α-syn对多巴胺能神经元的损害,而内质网应激与自噬也都参与PD的病理过程。本课题观察α-syn mRNA、β-syn mRNA、内质网应激蛋白GRP78 mRNA和自噬蛋白Beclin-1 mRNA在6-OHDA诱导的PD模型大鼠的中脑、纹状体和下丘脑内的动态变化,α-syn在6-OHDA诱导的PD模型大鼠的中脑和纹状体内的动态变化,同时进行α-syn mRNA 和 β-syn mRNA、α-syn mRNA 和 GRP78 mRNA、α-syn mRNA 和 Beclin-1 mRNA、GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA、α-syn mRNA 和 α-syn 的相关性分析。方法:本实验应用成年健康SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,220-250 g。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,在左侧前脑内侧束内,单点注射6 μl（浓度为4 μg/μl）的6-OHDA,坐标为tooth bar:-2.3 mm,antero-Posterior:-4.4 mm,medio-lateral:1.2 mm,dorso-ventral:-7.8 mm。假手术组的 10 只大鼠注射 6μl的0.02%维生素C生理盐水。分为假手术组、3 h组、12 h组、24 h组、72 h组和144 h组,每组10只。分别造模至相应时间,在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,取中脑、纹状体和下丘脑。采用RT-PCR方法检测中脑、纹状体和下丘脑内的 α-syn mRNA、β-syn mRNA、GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA 的含量;ELISA测定中脑和纹状体内的α-syn的含量;并用Pearson相关分析α-syn mRNA与β-syn mRNA、α-syn mRNA 与 GRP78 mRNA、α-syn mRNA Beclin-1 mRNA、GRP78 mRNA 与Beclin-1 mRNA、α-syn mRNA 与 α-syn 之间的相关性。结果:1.α-syn mRNA、β-syn mRNA、GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA 在不同部位动态表达中脑:当6-OHDA注射后,α-syn mRNA在3 h达到高峰,在3 h至144 h之间保持着直线下降;β-syn mRNA、GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA在12 h达到高峰,在12 h至144 h之间保持着直线下降。纹状体:当6-OHDA注射后,α-syn mRNA在3 h达到高峰,在3 h至72 h之间保持着直线下降,随后又逐步上升;β-syn mRNA、GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA在12 h达到高峰,在12 h至72 h之间保持着直线下降,随后又逐步上升。下丘脑:当 6-OHDA 注射后,α-syn mRNA、β-syn mRNA、GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA在3 h达到高峰,在3 h至24 h之间保持着直线下降,随后又逐步上升。2.α-syn在不同部位动态表达中脑:当6-OHDA注射后,α-syn在3 h达到高峰,在3 h至144 h之间保持着直线下降。纹状体:当6-OHDA注射后,α-syn在3h达到高峰,在3h至72 h之间保持着直线下降,随后又逐步上升。3.α-syn mRNA 和 β-syn mRNA、α-syn mRNA 和 GRP78 mRNA、α-syn mRNA 和 Beclin-1 mRNA、GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA在不同部位的相关性Pearson相关分析显示:在中脑和纹状体,α-syn mRNA和β-syn mRNA、α-syn mRNA 和 GRP78 mRNA、α-syn mRNA 和 Beclin-1 mRNA 在 0 至 3 h、12 h 至 144 h 呈显著正相关（P<0.05）;α-syn mRNA和β-syn mRNA、α-synmRNA 和 GRP78 mRNA、α-syn mRNA 和 Beclin-1 mRNA 在 3 h 至 12 h 呈显著负相关（P<0.05）;GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA在0至144 h呈显著正相关（P<0.05）。在下丘脑,α-syn mRNA和β-syn mRNA、α-syn mRNA 和 GRP78 mRNA、α-syn mRNA 和 Beclin-1 mRNA、GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA在0至144 h呈显著正相关（P<0.05）。4.α-syn mRNA和α-syn在不同部位的相关性Pearson相关分析显示:在中脑和纹状体,α-syn mRNA和α-syn在0至144 h呈显著正相关（P<0.05）。结论:1.当 6-OHDA 注射后,α-syn mRNA、β-syn mRNA、GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA在不同部位呈动态表达。2.当6-OHDA注射后,α-syn在不同部位呈动态表达。3.在氧化应激早期,α-syn的含量上升,可能诱导机体内β-syn、GRP78和Beclin-1的表达。随后,β-syn、GRP78和Beclin-1的表达继续升高,可能减少α-syn的表达。实验三β-细辛醚对内质网应激及其IRE1/XBP1通路的影响目的:前期研究发现,内质网应激与PD关系密切,参与PD的病理过程,上一部分实验观察了 α-syn mRNA与GRP78 mRNA呈明显的相关性。本实验观察β-细辛醚对内质网应激及其IRE1/XBP1通路的影响。方法:本实验应用成年健康SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,220-250 g。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,在左侧前脑内侧束内,单点注射6 μl（浓度为4 μg/μl）的6-OHDA,坐标为tooth bar:-2.3 mm,antero-Posterior:-4.4mm,medio-lateral:1.2mm,dorso-ventral:-7.8 mm。假手术组的 10 只大鼠注射6 μ l的0.02%维生素C生理盐水。造模一个月后,将造模大鼠腹腔内注射0.5 mg/kg体质量的APO,大鼠会在水平地面转圈,向健侧旋转圈数大于7圈/min的大鼠为成功PD模型。将造模成功的大鼠随机分为5组,每组10只。分别为模型组（1 ml/100 g/日蒸馏水,灌胃）、4-苯基丁酸组（100 mg/kg/日4-苯基丁酸,腹腔注射）、衣霉素组（0.5 mg/kg/周衣霉素,腹腔注射）、β-细辛醚组（15mg/kg/日β-细辛醚,灌胃）和IRE1抑制剂组（15 mg/kg/日STF-083110,腹腔注射）给药4周。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,脑内取纹状体和中脑。western blot测定中脑内p-IRE1 和 XBP1 的表达,RT-PCR 测定纹状体内 GRP78 mRNA、CHOP mRNA、IRE1 mRNA和XBP1 mRNA的表达。结果:1.纹状体内GRP78 mRNA和CHOP mRNA的表达与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的GRP78 mRNA和CHOP mRNA的水平显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,β-细辛醚组和4-苯基丁酸组大鼠的GRP78 mRNA和CHOP mRNA的水平显著性减少（P<0.05）。与4-苯基丁酸组大鼠比较,β-细辛醚组大鼠的GRP78 mRNA和CHOP mRNA的水平无显著性差异（P>0.05）。2.中脑内p-IRE1和XBP1的表达与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的p-IRE1和XBP1的水平显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,β-细辛醚组和IRE1抑制剂组大鼠的p-IRE1和XBP1的水平显著性减少（P<0.05）。与IRE1抑制剂组大鼠比较,β-细辛醚组大鼠的p-IRE1和XBP1的水平无显著性差异（P>0.05）。3.纹状体内IRE1 mRNA和XBP1 mRNA的表达与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的IRE1 mRNA和XBP1 mRNA的水平显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,β-细辛醚组和IRE1抑制剂组大鼠的IRE1 mRNA和XBP1 mRNA的水平显著性减少（P<0.05）。与IRE1抑制剂组大鼠比较,β-细辛醚组大鼠的IRE1 mRNA和XBP1 mRNA的水平无显著性差异（P>0.05）。结论:在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中,β-细辛醚可能抑制内质网应激并通过抑制IRE1/XBP1通路对多巴胺能神经元起到保护作用。实验四在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中观察内质网应激与自噬的关系目的:研究表明,内质网应激与自噬与PD关系密切,都参与PD的病理过程。也有研究表明,在其他疾病中,内质网应激诱导自噬的发生。本实验观察在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中,内质网应激与自噬的关系。方法:本实验应用成年健康SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,220-250 g。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,在左侧前脑内侧束内,单点注射6 μl（浓度为 4 μg/μl）的 6-OHDA,坐标为 tooth bar:-2.3 mm,antero-Posterior:-4.4 mm,medio-lateral:1.2mm,dorso-ventral:-7.8mm 假手术组的 10 只大鼠注射 6 μ l的0.02%维生素C生理盐水。造模一个月后,将造模大鼠腹腔内注射0.5 mg/kg体质量的APO,大鼠会在水平地面转圈,向健侧旋转圈数大于7圈/min的大鼠为成功PD模型。将造模成功大鼠随机分为5组,每组10只。分别为模型组（0.1 ml/100 g/日生理盐水,腹腔注射）、4-苯基丁酸组（100 mg/kg/日4-苯基丁酸,腹腔注射）、衣霉素组（0.5 mg/kg/周衣霉素,腹腔注射）、3-MA组（3 mg/kg/日3-MA,腹腔注射）和雷帕霉素组（1 mg/kg/日雷帕霉素,腹腔注射）给药4周。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,脑内取中脑。western blot测定中脑内内质网应激相关指标GRP78和自噬相关指标Beclin-1的表达,RT-PCR测定中脑内GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA的表达。结果:1.中脑内GRP78和Beclin-1的表达与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的GRP78和Beclin-1的水平显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,3-MA组大鼠的Beclin-1显著性减少（P<0.05）,GRP78无显著性变化（P>0.05）;雷帕霉素组大鼠的Beclin-1显著性增加（P<0.05）,GRP78无显著性变化（P>0.05）;4-苯基丁酸组大鼠的GRP78和Beclin-1都显著性减少（P<0.05）;衣霉素组大鼠的GRP78和Beclin-1都显著性增加（P<0.05）。2.中脑内 GRP78 mRNA 和 Beclin-1 mRNA 的表达与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA的水平显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,3-MA组大鼠的Beclin-1 mRNA显著性减少（P<0.05）,GRP78 mRNA无显著性变化（P>0.05）;雷帕霉素组大鼠的Beclin-1 mRNA显著性增加（P<0.05）,GRP78 mRNA无显著性变化（P>0.05）;4-苯基丁酸组大鼠的GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA都显著性减少（P<0.05）;衣霉素组大鼠的GRP78 mRNA和Beclin-1 mRNA 都显著性增加（P<0.05）。结论:在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中,内质网应激可能诱导自噬的发生。实验五β-细辛醚对PERK/CHOP/Bcl-2/Beclin-1内质网应激-自噬通路的影响目的:我们前期发现,β-细辛醚能够通过调节JNK/Bcl-2/Beclin-1自噬通路对6-OHDA诱导的PD模型大鼠起到神经保护作用。前一部分实验表明在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中,内质网应激可能诱导自噬的发生。本实验观察β-细辛醚对6-OHDA诱导的PD模型大鼠PERK/CHOP/Bcl-2/Beclin-1内质网应激-自噬通路的影响。方法:本实验应用成年健康SPF级SD大鼠40只,雌雄各半,220-250 g。在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,在左侧前脑内侧束内,单点注射6 μl（浓度为4 μg/μl）的6-OHDA,坐标为tooth bar:-2.3 mm,antero-Posterior:-4.4 mm,medio-lateral:1.2mm,dorso-ventral:-7.8 mm。假手术组的 10 只大鼠注射 6μl的0.02%维生素C生理盐水。造模一个月后,将造模大鼠腹腔内注射0.5 mg/kg体质量的APO,大鼠会在水平地面转圈,向健侧旋转圈数大于7圈/min的大鼠为成功PD模型。将造模成功大鼠随机分为3组,每组10只。分别为模型组（1 ml/100 g/日蒸馏水,灌胃）、PERK抑制剂组（0.125 mg/kg/日 ISRIB,腹腔注射）和β-细辛醚组（15 mg/kg/日β-细辛醚,灌胃）给药4周,在10%水合氯醛（350 mg/kg体质量）麻醉状态下,脑内取中脑和纹状体。western blot测定纹状体内GRP78、CHOP、p-PERK、Beclin-1 和 Bcl-2 的表达,RT-PCR 测定中脑内 GRP78 mRNA、PERK mRNA 和 CHOP mRNA的表达,流式细胞术测定中脑内Beclin-1和Bcl-2的表达。结果:1.纹状体内 GRP78、CHOP、p-PERK、Beclin-1 和 Bcl-2 的表达与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的GRP78、CHOP、p-PERK和Beclin-1的水平显著性增加（P<0.05）;Bcl-2的水平显著性减少（P<0.05）。与模型组大鼠比较,β-细辛醚组和PERK抑制剂组大鼠的GRP78、CHOP、p-PERK和Beclin-1的水平显著性减少（P<0.05）;Bcl-2的水平显著性增加（P<0.05）。与PERK抑制剂组大鼠比较,β-细辛醚组大鼠的GRP78、CHOP、p-PERK、Beclin-1和Bcl-2的水平无显著性差异（P>0.05）。2.RT-PCR 测定中脑内 GRP78 mRNA、PERK mRNA 和 CHOP mRNA 的含量与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的GRP78 mRNA、PERK mRNA和CHOP mRNA的水平显著性增加（P<0.05）。与模型组大鼠比较,β-细辛醚组和PERK抑制剂组大鼠的GRP78 mRNA、PERK mRNA和CHOP mRNA的水平显著性减少（P<0.05）。与PERK抑制剂组大鼠比较,β-细辛醚组大鼠的GRP78 mRNA、PERK mRNA和CHOP mRNA的水平无显著性差异（P>0.05）。3.中脑内Beclin-1和Bcl-2的表达率与假手术组大鼠比较,模型组大鼠的Beclin-1的水平显著性增加（P<0.05）;Bcl-2的水平显著性减少（P<0.05）。与模型组大鼠比较,β-细辛醚组和PERK抑制剂组大鼠的Beclin-1的水平显著性减少（P<0.05）;Bcl-2的水平显著性增加（P<0.05）。与PERK抑制剂组大鼠比较,β-细辛醚组大鼠的Beclin-1和Bcl-2的水平无显著性差异（P>0.05）。结论:β-细辛醚可能通过抑制PERK/CHOP/Bcl-2/Beclin-1内质网应激-自噬通路对6-OHDA诱导的PD模型大鼠起到神经保护作用。总结论:1.β-细辛醚联合小剂量美多巴能够改善6-OHDA诱导的PD模型大鼠的行为学,减轻肝肾功能损害,增加纹状体内L-DOPA、DA、DOPAC和5-HT的含量,增加血清内DA的含量,抑制血清中的DDC。2.在氧化应激的早期,α-syn的含量上升,可能诱导β-syn、GRP78和Beclin-1的表达。随后,β-syn、GRP78和Beclin-1的表达继续升高,可能减少α-syn的表达。3.β-细辛醚可能抑制内质网应激及其IRE1/XBP1通路。4.在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中,内质网应激可能诱导自噬的发生。5.β-细辛醚可能抑制PERK/CHOP/Bcl-2/Beclin-1内质网应激-自噬通路。