论文部分内容阅读
背景:对于全球妇女而言,宫颈癌不仅严重危害了患者的身体健康,更严重危害了患者的心理健康,宫颈癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一,在妇女最常见的恶性肿瘤中宫颈癌的发病率排乳腺癌之后占第2位,子宫颈癌的死亡率占第3位,而子宫颈癌在我国女性生殖道恶性肿瘤中的排名是第1位[1]。如今宫颈癌的治疗方式、方法较多,包括手术、放疗、化疗等,而宫颈癌在生物治疗及靶向治疗上暂无明显突破性发现,淋巴转移是影响宫颈癌患者预后的重要因素,防治淋巴转移一直是恶性肿瘤治疗的难点。maspin基因1994年发现以来,众多科学家抑制对基因的抑癌性质进行探索,发现其可以增强肿瘤细胞的粘附性、抑制其增值、促进凋亡等能力,可以说maspin基因是一个抑癌功能较为全面的基因;近年来随着更多及更有效淋巴管标志物及淋巴管生成因子被发现,血管密度及微淋巴管密度是多种实体瘤预后的标志物之一[2]。磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphateidyli-nositol3 kinase/serine-threonine kinase,PI3K/A kt)信号转导通路可以促进恶性细胞增殖,抑制恶性肿瘤细胞凋亡,并且可以针对多种化疗药物产生耐药[3]。有研究表明AKT通路在肿瘤淋巴管生成及淋巴结转移中起着重要作用[4]。Maspin是Zou等在1994年运用消减杂交技术比较乳腺癌组织及正常乳腺组织中发现的一种新型的基因,maspin属于一个新成员[5]。Narayan等[6]研究证实maspin基因通过抑制成纤维细胞因子及VEGF的生成而抑制血管的生成。Maspin基因的高表达与肿瘤细胞耐药性呈负相关,可以调高化疗药物针对恶性肿瘤细胞的凋亡率,同样证明maspin基因的表达是指导预后的一个重要指标[7][8］。Nam E等[7]将含有maspin基因的质粒注入植有NCIH157肺癌细胞株的裸鼠瘤体中,含有maspin基因质粒的实验组成瘤体积远小于对照组(P<0.05),预示着maspin基因在基因治疗方面有着广阔的前景。此外,通过大量的临床实验及动物实验证实maspin基因的表达具有抑制侵袭、肿瘤细胞的迁移、抑制肿瘤血管生成的特性[9][10][11][12]。近年来肿瘤微淋巴管的相关研究成为研究热点,大量的实验证明[13][14][15][16]maspin基因与调节肿瘤微淋巴管的生成有着密切关系。PI3K/AKT通路在肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭及抗凋亡作用都起到举足轻重的作用[17]。此外有研究显示人乳头瘤病毒16(HPV16)分泌的E7蛋白可以激活AKT通路调控肿瘤细胞的增殖和转移[18],这与宫颈癌的发生发展有着密切关联,治疗人乳头瘤病毒也是预防宫颈癌发生的重要手段。Chen等[19]利用免疫组化的方法检测55例胃腺癌的石蜡手术标本mTOR、AKT、VEGF-C、VEGF-D和淋巴管密度的表达情况,实验结果表明淋巴管密度与mTOR、AKT、VEGF-C、VEGF-D呈正相关。说明AKT通路的异常激活可能是众多癌症发生发展以及淋巴结转移的重要途径。因此我们提出的问题是maspin基因抑制肿瘤的发生、发展以及抑制肿瘤微淋巴管生成的作用的作用通路是否与PI3K/AKT通路有关,这对我们探讨如何抑制肿瘤淋巴转移、肿瘤治疗的靶点选取有着重要的意义。目的:本课题拟探讨宫颈鳞癌中Maspin基因表达对AKT通路中AKT、P-AKT表达的影响,以及Maspin基因是否可以通过影响AKT通路的表达进而影响肿瘤微淋巴管生成及淋巴结转移过程。方法:收集2009年2月1日到2016年2月1日滨州医学院附属医院收治的107例宫颈石蜡组织标本(慢性宫颈炎20例、低级别鳞状上皮内病变20例、高级别鳞状上皮内病变20例、宫颈癌组47例,宫颈癌组根据术后病理有无淋巴结转移分为两组,淋巴结未转移者为宫颈癌(1)组、淋巴结转移者为宫颈癌(2)组),用免疫组化SP法分别检测maspin、AKT、P-AKT的表达情况及肿瘤微淋巴管密度(Lymphatic microvessel density,LMVD)。结果:Maspin蛋白在不同宫颈组织中的阳性表达率逐渐下降,高级别鳞状上皮内病变maspin蛋白的阳性率明显高于宫颈癌组,高级别鳞状上皮内病变与宫颈癌(1)组比较,P=0.023,高级别鳞状上皮内病变与宫颈癌(2)组比较P= 0.005,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌(1)组maspin蛋白的阳性率39.1%,宫颈癌(2)组阳性率为13.3%,maspin蛋白阳性率下降,但两者差异无明显统计学差异,P=0.264。AKT、P-AKT在不同宫颈组织中的阳性表达率逐渐上升;在宫颈癌组中AKT、P-AKT阳性表达主要位于胞质中,少部分位于宫颈癌细胞的胞核中。在宫颈鳞癌中maspin蛋白表达与AKT、P-AKT的表达均呈负相关。在宫颈癌(1)组、宫颈癌(2)组中AKT、P-AKT的表达率同其他各组相比均有统计学意义(P<0.05);AKT、P-AKT在HSIL组与宫颈癌(1)、宫颈癌(2)组比较差异有统计学意义(P<0.05),AKT的表达在宫颈癌(1)组与宫颈癌(2)组比较差异无统计学意义,P-AKT的表达在宫颈癌(1)组与宫颈癌(2)组比较差异有统计学意义,P= 0.042,同时我们发现在宫颈癌中AKT的表达与LMVD无相关性,P-AKT的表达与LMVD呈正相关。结论:随着宫颈病变的进展maspin蛋白的表达逐渐下降,AKT、P-AKT的表达逐渐上升,高级别鳞状上皮内病变中maspin的表达明显高于宫颈癌,可能说明mmaspin蛋白在宫颈高级别鳞状上皮内病变到宫颈癌变过程中起着重要作用,在宫颈癌中maspin蛋白的表达与AKT、P-AKT的表达呈显著负相关,P-AKT的表达与LMVD及术后是否淋巴结转移均呈正相关,maspin蛋白的失表达可能导致PI3K/AKT通路的异常激活,PI3K/AKT通路的异常激活促进肿瘤微淋巴的生成,最终导致肿瘤细胞的淋巴转移。