【摘 要】
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肌生成抑制素基因(myostatin，MSTN)是肌肉生长的负调控因子，其变异或缺失会导致肌细胞增生与肌纤维肥大。RNA干扰(RNAi)是一种特异性降解靶基因mRNA序列的基因表达调节机制，具有
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肌生成抑制素基因(myostatin，MSTN)是肌肉生长的负调控因子，其变异或缺失会导致肌细胞增生与肌纤维肥大。RNA干扰(RNAi)是一种特异性降解靶基因mRNA序列的基因表达调节机制，具有高效、特异、快速等优点，已成为研究基因功能和表达调控的有效方法。
目前通过合成siRNA来抑制MSTN基因表达或阻断与该基因功能相关的信号转导途径，已获得了双肌表现型的斑马鱼、大鼠及小鼠等，而利用该方法对绵羊MSTN基因的研究国内外还未见相关的报道。
本实验目的在于筛选有效抑制绵羊myostatin基因的siRNA分子，以小鼠为模型研究siRNA对MSTN基因的抑制作用。通过设计8对针对绵羊MSTN mRNA序列siRNA单链引物，经过退火形成双链siRNA模板插入pSilencer(TM)4.1-CMV neo载体，连接构建成Psi-mstn-siRNA载体，转染C2C12细胞后，利用RT-PCR及real time-PCR检测干扰效果，筛选有效的siRNA分子。结果表明所构建的8条siRNA分子中有3条对MSTN基因有显著抑制作用，其中psi-mstn-717和psi-mstn-986分子对MSTN mRNA抑制效率分别达到61％和53％。接着我们尝试着检验这两条siRNA分子在动物活体中的干扰作用。采用直接注射配合电击融合法将有活性的siRNA分子导入小鼠腓肠肌，两周后处死动物，采用realtimePCR及免疫组化法检测干扰分子对MSTN基因的抑制作用，利用组织切片、图像分析软件检测肌纤维面积的变化。结果表明注射psi-msm-717和psi-mstn-986质粒的小鼠相对于注射对照质粒的小鼠，肌纤维面积分别增大33％和44％，各实验组小鼠MSTN mRNA及蛋白表达量没有呈现显著的变化。通过上述实验我们得出构建的两条siRNA重组质粒能有效的抑制MSTN mRNA的表达，并推测这两个分子在体内能够取得干扰MSTN表达的作用。
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